心理應(yīng)激對大鼠造血系統(tǒng)鐵代謝的影響.pdf

1、目的：了解心理應(yīng)激對大鼠造血系統(tǒng)鐵代謝及紅細(xì)胞生成的影響，為闡明心理應(yīng)激與紅細(xì)胞代謝關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法： 1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組雄性SD大鼠，體質(zhì)量80±5g，卜海兩普爾-必凱公司提供。單籠飼養(yǎng)，自由飲食，室溫24±1℃，相對濕度50～60％，12h/12h光暗周期節(jié)律。適應(yīng)3d后按體重隨機(jī)分成空白對照組(control group，CG)、心理應(yīng)激組(psychological stress group，PSG)和足底

2、電擊組(foot-shock stress group，F(xiàn)SG)，每組再分為3d、7d和14d三個(gè)亞組。 2．建立SD大鼠心理應(yīng)激模型按照文獻(xiàn)[17]采用Communication Box System制作大鼠心理應(yīng)激模型。Communication Box System由透明內(nèi)烯酸板組成，一半小室(A)底部鋪板絕緣，另一半小室(B室)通電。在B室的實(shí)驗(yàn)大鼠接受30min/d，足底電擊(電壓90V，電流0.80mA)；電擊組大鼠

3、接受電擊時(shí)跳躍，尖叫，在 A 室的實(shí)驗(yàn)大鼠通過視覺聽覺產(chǎn)生恐懼的心理反應(yīng)，即為心理應(yīng)激大鼠模型。按計(jì)劃完成不同周期應(yīng)激暴露后，各組大鼠立刻斷頭處死取組織標(biāo)本備用。 3．大鼠血清、肝臟和脾臟鐵含量的測定采用原子吸收分光光度計(jì)(日本日立公司Z-2000型)火焰法測定血清鐵(serum ironSI) 和肝脾鐵含量。100 ug/mL 鐵標(biāo)準(zhǔn)貯備液(GBW08616)由國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心提供。 4．大鼠紅細(xì)胞參數(shù)的測定使用KX-

4、21血細(xì)胞分析儀(SYSMEX，日本)測定血紅蛋白(hemoglobin，Hb)濃度、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(red blood cell count，RBC)、紅細(xì)胞壓積(hematocrit，Hct)、平均紅細(xì)胞體積(mean corpuscular volume，MCV)和紅細(xì)胞分布寬度(red blood celldistribution width，RDW)。 5．大鼠骨髓鐵含量的測定取大腿股骨頭新鮮骨髓制成涂片，于24h內(nèi)用酸性

5、亞鐵氰化鉀進(jìn)行染色，顯微鏡下觀察鐵染色顆粒，進(jìn)行半定量和定性分析。 6.大鼠血清鐵調(diào)節(jié)蛋白及促紅細(xì)胞生成素含量的測定應(yīng)用ELISA方法測定大鼠血清鐵蛋白(serum ferritin，SF)、血清轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(serum transferrin receptor，sTfR)和血清促紅細(xì)胞生成素(serum erythropoietin，sEPO)。ELISA試劑盒(購自R&D Sysytems Inc，USA)組成：96孔酶標(biāo)板

6、、底物A、底物B、濃縮洗滌液、終止液、酶聯(lián)物、標(biāo)準(zhǔn)品一套。測試儀器：自動(dòng)酶標(biāo)儀(SUNRISE，美國)。 7.統(tǒng)計(jì)方法： 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包采用one-way ANOVA檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，顯著性水平為P<0.05，非常顯著性水平為P<0.01。 結(jié)果： 1.心理應(yīng)激對大鼠血清鐵含量的影響與對照組相比，3d、7d和14d心理應(yīng)激組大鼠的S1分別下降

7、28.4％、27.7％和34.0％(P<0.05)，3d、7d和14d足底電擊組大鼠的SI則分別下降28.5％、18.3％和40.7％，(P<0.05)。相同應(yīng)激周期的心理應(yīng)激組與足底電擊組大鼠相比，S1含量無顯著差異(P>0.05)。 2.心理應(yīng)激對大鼠骨髓鐵含量的影響酸性亞鐵氰化鉀染色顯示，與對照組比較，心理應(yīng)激7d組大鼠和足底電擊7d組大鼠骨髓細(xì)胞外鐵含量明顯減少，心理應(yīng)激14d組大鼠和足底電擊14d組大鼠骨髓細(xì)胞外鐵含量

8、進(jìn)一步下降，甚至缺如；而相同應(yīng)激周期的心理應(yīng)激組與足底電擊組相比，無顯著差異。 3.心理應(yīng)激對大鼠血清鐵調(diào)節(jié)蛋白的影響與對照組相比，心理應(yīng)激3d大鼠的SF顯著升高(P<0.05)；而連續(xù)心理應(yīng)激7d和14d組大鼠的SF分別下降35.9％和28.3％(P<0.05)，同時(shí)伴有sTfR分別升高42.2％和31.5％(P<0.01)。而相同應(yīng)激周期的足底電擊組大鼠血清鐵調(diào)節(jié)蛋白的變化和心理應(yīng)激組基本一致(P>0.05)。 4.

9、心理應(yīng)激對大鼠紅細(xì)胞參數(shù)的影響與對照組相比，7d和14d心理應(yīng)激組大鼠的Hb分別下降10.0％和12.8％(P<0.05)、RBC分別下降4.7％和9.8％(P<0.05)、Hct分別下降7.0％和12.9％(P<0.05)、MCV分別下降1.6％和7.3％(P<0.05)，而RDW則分別增加11.2％和22.5％(P<0.05)：7d，14d足底電擊組大鼠的Hb分別下降8.7％利9.9％(P<0.05)、RBC分別下降6.1％和10.

10、5％(P<0.05)、Hct分別下降5.4％和11.4％(P<0.05)、MCV分別下降3.6％和1.5％(P>0.05)，而RDW則分別增加3.6％和6.1％(P>0.05)。相同應(yīng)激周期的心理應(yīng)激組大鼠紅細(xì)胞各參數(shù)和足底電擊組大鼠相比，均無顯著差異(P>0.05)。 5. 心理應(yīng)激對大鼠進(jìn)食量和體重的影響與對照組相比，心理應(yīng)激3d、7d或14d的大鼠進(jìn)食量和體重均無明顯變化(P>0.05)。相同應(yīng)激周期的心理應(yīng)激組大鼠進(jìn)食量

11、和體重與足底電擊組變化基本一致(P>0.05)。 6.心理應(yīng)激對大鼠肝鐵和脾鐵含量的影響與對照組相比，心理應(yīng)激7d和14d組大鼠肝鐵含量分別升高41.3％利24.9％(P<0.05)，脾鐵含量分別升高12.3％和10.4％(P<0.05)：足底電擊7d利14d組大鼠肝鐵含量分別升高24.7％和10.3％(P<0.05)，脾鐵含量分別升高15.1％和17.8％(P<0.05)。相同應(yīng)激周期的心理應(yīng)激組大鼠肝、脾鐵含量和足底電擊組大

12、鼠相比，無顯著差異(P>0.05)。 7.心理應(yīng)激對大鼠促紅細(xì)胞生成素的影響與對照組相比，14d心理應(yīng)激組和足底電擊組sEPO分別下降12.3％和35.8％(P<0.05)；14d足底電擊組與心理應(yīng)激組相比，sEPO顯著升高26.6％(P<0.05)。 結(jié)論： 1.連續(xù)心理應(yīng)激3d可導(dǎo)致大鼠的血清鐵含量明顯下降，而連續(xù)心理應(yīng)激14d可導(dǎo)致大鼠血清鐵含量進(jìn)一步下降。心理應(yīng)激大鼠血清鐵含量的變化趨勢與軀體應(yīng)激(足底電

13、擊)大鼠基本一樣。 2．心理應(yīng)激可以導(dǎo)致大鼠骨髓鐵含量顯著降低。連續(xù)應(yīng)激14d時(shí)，SD大鼠骨髓細(xì)胞外鐵染色減少程度較應(yīng)激7d時(shí)更顯著。上述結(jié)果表明，心理應(yīng)激大鼠血清鐵水平降低可進(jìn)而影響其骨髓鐵含量。 3．較長時(shí)間的心理應(yīng)激(連續(xù)應(yīng)激7d)可導(dǎo)致大鼠血清鐵蛋白含量顯著下降，同時(shí)伴有血清轉(zhuǎn)鐵蛋白受體含量顯著升高。綜合心理應(yīng)激可影響血清鐵和骨髓鐵含量等觀察結(jié)果，提示心理應(yīng)激引起的血清鐵含量降低，可導(dǎo)致機(jī)體貯存鐵和骨髓鐵減少，進(jìn)

14、而影響到骨髓的紅細(xì)胞生成。至于應(yīng)激3d組大鼠SF含量增加，可能與SF為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白有關(guān)，即SF在應(yīng)激早期升高；但隨著應(yīng)激狀態(tài)的延續(xù)，血清鐵持續(xù)降低，SF含量逐漸下降。確切原因有待進(jìn)一步探討。 4．心理應(yīng)激可導(dǎo)致SD大鼠的RBC、Hb、HCt等參數(shù)明顯下降，下降幅度隨著應(yīng)激周期的延長而增加：同時(shí)伴有MCV顯著下降，RDW顯著開高，RDW/MCV顯著升高 (RDW/MCV 比值升高，在臨床診斷中作為小細(xì)胞低色素性貧血的診斷指標(biāo)之

15、一)。綜合本課題研究結(jié)果表明，長時(shí)間處于心理應(yīng)激狀態(tài)，可因?yàn)檠彖F和骨髓鐵的降低而在一定程度上影響紅細(xì)胞的生成。 5．本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，心理應(yīng)激對大鼠進(jìn)食量和體重均無明顯影響，提示心理應(yīng)激大鼠血清鐵降低可能與飲食鐵攝入量無關(guān)。然而，心理應(yīng)激是否會(huì)影響飲食鐵吸收率則需要進(jìn)一步研究。 6．一般情況下，紅細(xì)胞生成絕對不足或相對不足可導(dǎo)致sEPO含量升高，本實(shí)驗(yàn)中心理應(yīng)激組大鼠在連續(xù)應(yīng)激14d時(shí)sEPO卻顯著降低。心理應(yīng)激導(dǎo)致sE