土壤磷的有效性與溶磷微生物的產(chǎn)酶特性研究.pdf

1、有機(jī)磷是土壤磷庫(kù)的重要組成部分，微生物產(chǎn)生磷酸酶是土壤有機(jī)磷礦化為植物有效磷的必要條件之一。本工作采用分離的兩株產(chǎn)磷酸酶活性較高的菌株-芽孢桿菌X21和酵母菌YT，研究了不同發(fā)酵條件對(duì)產(chǎn)酶活性的影響和培養(yǎng)基中可溶性磷對(duì)產(chǎn)酶活性的影響，分別通過(guò)16srRNA和ITS特異性序列對(duì)兩株菌進(jìn)行了鑒定，并研究了X21和YT在紅壤林地和水稻土中的產(chǎn)酶能力及對(duì)兩種土樣有效磷的影響，同時(shí)考察了不同菌株對(duì)污泥和煙草混合基質(zhì)中磷素的影響。 本工作首

2、先研究了發(fā)酵條件對(duì)溶解有機(jī)磷菌株一芽孢桿菌X21的產(chǎn)酶能力的影響。研究了碳、氮源種類及碳氮比對(duì)菌株產(chǎn)堿性磷酸酶的影響，以葡萄糖為碳源、CO(NH2)2為氮源、碳氮比為10:1時(shí)，菌株的產(chǎn)酶活性較高。以不同有機(jī)磷為底物時(shí)，芽孢桿菌X21的產(chǎn)生的堿性磷酸酶活性不同。以植酸鈣為底物時(shí)產(chǎn)酶活性高于植酸鈉和卵磷脂。2.5g/L的卵磷脂濃度可誘導(dǎo)X21產(chǎn)生高的磷酸酶活性。 酵母菌YT具有較高的胞外酸性磷酸酶活性，可達(dá)到479170.8 U/

3、g(干細(xì)胞重)。糖蜜為碳源、(NH4)2SO4為氮源和40:1的碳氮比可使菌株產(chǎn)生較高的酸性磷酸酶活性。 芽孢桿菌X21具有多種酶活性，如淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶和植酸酶等。使用玉米粉和豆粕粉培養(yǎng)基，初始pH7.5和含水量為100％的培養(yǎng)條件下有利于產(chǎn)酶。在培養(yǎng)基中分別添加0.1％Tween-80和0.1％CaCl2對(duì)產(chǎn)蛋白酶有促進(jìn)作用，可分別使蛋白酶活性提高27.2％和48.4％.0.1％CaCl2對(duì)X21產(chǎn)植酸酶有促進(jìn)作用，

4、植酸酶活性提高86.8％。 結(jié)合菌體菌落的形態(tài)特征、生理生化實(shí)驗(yàn)以及16SrRNA和ITS測(cè)序，對(duì)芽孢桿菌X21和酵母YT鑒定的結(jié)果表明兩菌分別為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)和葡萄牙棒孢酵母(Clavispora lusitaniae)。實(shí)驗(yàn)表明兩菌可在滅菌土壤中增殖并產(chǎn)磷酸酶，并能提高土壤有效磷的含量。將不同的微生物(X21、YT、ZH、LV和MB)在滅菌的脫水污泥和煙草廢料混合基質(zhì)中發(fā)酵7d后也可產(chǎn)磷酸