版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、玉米(Zea mays L.ssp.Mays)是食品和飼料的主要來源之一,其淀粉產(chǎn)量和品質(zhì)決定了它在人類生產(chǎn)和生活中的地位。為深入了解玉米淀粉合成的分子調(diào)控機(jī)理,本研究首先以B73、ae/wx和sh1授粉后15天的胚乳為材料,利用18K Affymetrix玉米基因組芯片平臺,研究了突變體材料中基因表達(dá)譜的變化,發(fā)現(xiàn)了淀粉合成受阻后糖的積累對其它物質(zhì)代謝和基因表達(dá)調(diào)控的影響;在此基礎(chǔ)上,對可能參與淀粉合成的基因以多個自交系為材料,分析它
2、們在葉片和胚乳發(fā)育過程中的表達(dá)模式,研究了不同成員對胚乳淀粉合成的貢獻(xiàn)。同時,為滿足工業(yè)上對高直鏈淀粉的需求,利用RNAi策略敲除ZmSBE IIb或ZmSBE I & ZmSBE IIb。主要結(jié)果如下: 1.胚乳基因表達(dá)譜分析 以B73、sh1、ae/wx授粉后15天的胚乳為材料進(jìn)行寡聚核苷酸表達(dá)譜芯片分析。與B73相比,sh1突變體中2706個探針對發(fā)生顯著變化,ae/wx突變體中1966個探針對發(fā)生顯著變化(FDR
3、<0.1%;q value<0.01)(玉米探針總量17,622個,檢測13,495個基因)。為減少玉米自交系背景差異對基因表達(dá)的影響,分析了B73和Mo17授粉后13天和19天的胚乳中基因表達(dá)的差異,分別找到差異基因609個和889個(FDR<5%),認(rèn)為是由遺傳背景差異造成的,從ae/wx vs.B73中扣除了351個,從sh1 vs.B73中扣除390個,分別剩下1429(命名為Dae/wx)和1557(命名為Dsh1)個差異表達(dá)
4、基因進(jìn)行后續(xù)的分析,其中共同變化的835個。qRT-PCR結(jié)果表明,90.6%(29/32)的差異基因是可靠的。 2.差異基因的GO分析 Dae/wx中按p-value(<0.1)由小到大依次為脂類轉(zhuǎn)運(yùn)(6/12,指該芯片中參與脂類轉(zhuǎn)運(yùn)的12個成員中6個成員表達(dá)變化,下同)、丙酮酸脫羧酶(4/6)、糖類運(yùn)輸(4/7)和細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)成分(3/6),說明對碳水化合物代謝和脂類轉(zhuǎn)運(yùn)影響顯著;Dsh1中按p-value(<0.1)
5、由小到大依次為糖類運(yùn)輸(6/7)、高爾基體(4/5)、蔗糖合成酶(4/6)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑(5/9)、脂類運(yùn)輸(5/12)、細(xì)胞壁成分(6/18)和丙酮酸脫羧酶(3/6),說明除碳水化合物代謝和脂類轉(zhuǎn)運(yùn)影響顯著外,半胱氨酸蛋白酶抑制劑的表達(dá)降低反應(yīng)了脅迫和細(xì)胞發(fā)育的變化,說明該突變體中可能有更多基因表達(dá)變化和細(xì)胞學(xué)改變。 3.差異基因的功能注釋和分類 約72%的差異基因得到注釋并按照代謝途徑和功能分為14類,碳水化
6、合物和能量代謝、基因的轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后修飾、蛋白質(zhì)合成、蛋白調(diào)控和分子伴侶、脅迫/防御/衰老及物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)是受影響很大的代謝和調(diào)控過程,占共同變化基因的46.5%,占ae/wx單獨(dú)變化基因的53.7%,占shl單獨(dú)變化基因的47.1%。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),與淀粉生物合成相關(guān)的基因變化不多,而與糖中間代謝和能量相關(guān)的基因變化較多;TPS表達(dá)的降低反應(yīng)了淀粉合成基因sh2翻譯后AGPase活性下調(diào)。啟動子分析發(fā)現(xiàn),參與糖代謝的多數(shù)基因的啟動子中有糖響應(yīng)
7、元件。Pul和TPS可能是直接受高糖抑制表達(dá)的基因,而且SREATMSD (TTATCC) 、TATCCAOSAMY (TATCCA) 和 TATCCAYMOTIFOSRAMY3D(TATCCAY)3個糖抑制元件可能是下調(diào)基因表達(dá)的糖抑制位點(diǎn)。 兩個突變體中基因表達(dá)的不同變化反應(yīng)了淀粉積累和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的差異。突變體中糖的積累,可能形成了糖信號和脅迫信號,改變了信號轉(zhuǎn)導(dǎo),引起激素響應(yīng)和細(xì)胞組成蛋白的變化,改變了細(xì)胞周期。另外,還發(fā)現(xiàn)
8、母性遺傳基因和種子成熟相關(guān)基因的變化。 4.碳水化合物代謝基因和細(xì)胞周期基因隨胚乳發(fā)育的變化 以B73、ae/wx、sh1授粉后7天種子、15天和25天胚乳為材料,分析18個糖代謝差異基因和9個細(xì)胞周期調(diào)節(jié)相關(guān)的差異基因的表達(dá)模式,研究發(fā)現(xiàn)sh1突變體中Pul、SBE IIa、UGPase、SUS3和SS IIa基因表達(dá)模式發(fā)生改變,ae/wx突變體中Sh2-1、SUS3和SS IIa基因表達(dá)模式發(fā)生改變,揭示了突變體對
9、這些基因的巨大影響,反映了它們可能存在相互作用。糖轉(zhuǎn)運(yùn)、信號調(diào)節(jié)相關(guān)基因只改變胚乳發(fā)育過程中的表達(dá)量而不改變表達(dá)模式,可能是隨著糖的積累、細(xì)胞的發(fā)育等過程表達(dá)水平發(fā)生了改變。細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因表達(dá)水平發(fā)生了較明顯改變,但是它們的表達(dá)模式?jīng)]有明顯變化,表明雖然突變體中可能促進(jìn)了細(xì)胞分裂但并未打亂細(xì)胞周期,只是延長了細(xì)胞分裂時間,延緩了胚乳細(xì)胞發(fā)育進(jìn)程。徒手切片顯示突變體7天胚乳沒有明顯的分層,ae/wx突變體細(xì)胞核明顯變大而細(xì)胞大小差異不明
10、顯,sh1突變體細(xì)胞核明顯變小,細(xì)胞數(shù)目增加,說明突變體胚乳細(xì)胞結(jié)構(gòu)明顯改變。 5.淀粉生物合成基因的不同貢獻(xiàn) 以Q319、C7-2、q404、ZN-A和S8自交系的幼葉、成熟葉、成熟子房、授粉后1d、5d、10d的種子和15d、20d、25d的胚乳為材料,研究了參與淀粉合成的44個基因的表達(dá)模式,研究發(fā)現(xiàn)ZmGBSS I、ZmSS Ⅲ、ZmSBE IIb、ZmBT2-2、ZmSH2-2、ZmSh2-3、ZmBT1在胚乳
11、發(fā)育中后期特異性表達(dá),ZmSUS1、ZmSus1L、ZmSUS3、ZmSS I、ZmSS IIa、ZmSBE I、ZmISO1、ZmPul的表達(dá)在淀粉合成期顯著上調(diào),ZmUGP3和ZmSUT2在所有組織中高水平表達(dá),說明這些基因可能主要負(fù)責(zé)胚乳淀粉的生物合成。盡管ZmBT2-1和ZmSh2-1隨著胚乳發(fā)育表達(dá)下調(diào),但是一直有較高水平。亞細(xì)胞定位發(fā)現(xiàn),ZmSUS1、ZmSUS1L、ZmBT2-1、ZmSH2-1、ZmBT1、ZmSS、Zm
12、SBE、ZmISO1、ZmISO2、ZmPUL、ZmGPT和ZmPPT定位于質(zhì)體,ZmSUS2、ZmSUS3、ZmUGPase、ZmBT2-2、ZmSH2-2、ZmSH2-3、ZmPGI和ZmPPM定位于細(xì)胞質(zhì)中,而ZmSUT定位于細(xì)胞質(zhì)膜。這些結(jié)果為胚乳淀粉生物合成研究提供了新資料。 6.RNAi技術(shù)創(chuàng)造高直鏈淀粉玉米 為培育高直鏈淀粉玉米材料,根據(jù)淀粉合成相關(guān)基因的表達(dá)模式及已發(fā)表資料,利用RNAi技術(shù)使轉(zhuǎn)基因玉米S
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 小麥淀粉合成酶突變體的篩選及Wx突變體分子機(jī)制的研究.pdf
- 53699.ae1基因參與葉發(fā)育調(diào)控的功能及其ae1突變體表達(dá)譜的研究
- 水稻葉鞘突變體yjs和淀粉突變體q4359的表型分析及基因精細(xì)定位.pdf
- 玉米株高突變體的遺傳分析和初步基因定位.pdf
- 玉米胚乳淀粉合成相關(guān)基因的群體遺傳分析.pdf
- 水稻長護(hù)穎突變體和條紋葉突變體的基因鑒定與qRT-PCR表達(dá)分析.pdf
- 水稻“9311”突變體的篩選和突變體庫的構(gòu)建.pdf
- 玉米突變體庫構(gòu)建及株型突變體鑒定與基因定位.pdf
- 稻米品質(zhì)突變體庫的構(gòu)建及粉質(zhì)胚乳堊白突變體(flo6)的基因定位.pdf
- 牛Myostatin突變體基因Pro區(qū)和生物活性區(qū)的克隆、表達(dá)與功能研究.pdf
- 玉米穗軸扁平突變體的鑒定及基因定位.pdf
- 旱稻極窄葉突變體和長穗頸隱性高稈突變體的遺傳分析和基因定位.pdf
- BLyS突變體的構(gòu)建、表達(dá)、純化和功能鑒定.pdf
- 基于TILING的小麥淀粉合成關(guān)鍵基因突變體發(fā)掘與發(fā)達(dá)分析.pdf
- 玉米Mutator插入突變體庫構(gòu)建及抗旱突變體的篩選分析.pdf
- 小麥耐鹽突變體TaGSK1基因的分離和鑒定.pdf
- 水稻osmgd2-1a突變體的功能互補(bǔ)及相關(guān)基因表達(dá)變化的分析.pdf
- 玉米sk-A7110突變體的鑒定與基因定位.pdf
- 一個玉米雄穗軸發(fā)育突變體的形態(tài)鑒定和基因初步定位.pdf
- 可溶性組織因子及其突變體的基因克隆、表達(dá)和性質(zhì)研究.pdf
評論
0/150
提交評論