白藜三醇對培養(yǎng)豚鼠心室肌細胞鈣電流的影響.pdf

1、心肌細胞外的鈣離子進入細胞內(nèi)以及細胞內(nèi)的鈣轉(zhuǎn)運受到細胞膜和肌漿網(wǎng)上諸多蛋白質(zhì)的調(diào)控，維持著細胞內(nèi)鈣離子濃度的動態(tài)平衡狀態(tài)。細胞內(nèi)的鈣離子濃度異常不但影響興奮一收縮耦聯(lián)的過程，還可以引發(fā)心律失常，影響心肌的能量代謝，作為第二信使，影響細胞增殖，分化的多種通路以及影響線粒體的氧化磷酸化酶等多種作用。心肌細胞膜的表面存在兩種電壓調(diào)控的鈣通道：L-及T-型鈣通道。L-型鈣通道由于其電導(dǎo)較大及通道開放時間長而得名，是胞外鈣離子進入細胞的主要通道，

2、而T-型鈣通道則源于其低電導(dǎo)和短暫的通道開放時間。生理情況下，大多數(shù)哺乳動物在出生后不久，心室肌細胞的T-型鈣通道逐漸的減少甚至消失，成年哺乳動物的心室肌細胞中常缺如，但少數(shù)動物如豚鼠成年后心房及心室肌細胞內(nèi)仍可表達此通道。已有的研究報道白藜三醇不僅對急性分離的豚鼠心室肌細胞的Ica-L有抑制的作用，而且對INa，Iks，Iss,Ito均具有抑制作用且呈濃度依賴性，初步顯示出白藜三醇具有延長動作電位時程和心室有效不應(yīng)期，減少室性心律失常

3、發(fā)生的潛在作用。為了進一步探討白藜三醇抑制心律失常發(fā)生的可能機制、了解其對心室肌細胞鈣電流的慢性作用，本研究采用全細胞膜片鉗技術(shù)觀察白藜三醇對培養(yǎng)不同時間的豚鼠心室肌細胞鈣電流密度的變化。 目的:研究白藜三醇干預(yù)豚鼠心室肌細胞不同時間后鈣電流密度的變化，探討該藥物的可能作用機制。 方法 　　1.豚鼠心室肌細胞的分離與培養(yǎng)：雄性成年豚鼠，體重250-350g，應(yīng)用Langendorff心臟灌流裝置上逆行灌流，酶解分

4、離出單個心室肌細胞，接種于培養(yǎng)皿中，加入受試藥物白藜三醇，分為對照組，低劑量濃度組(RES 10μM)，中劑量濃度組(RES 30μM)，高劑量濃度組(RES100μM)，分別孵育24、48和72小時. 　　2.采用全細胞膜片鉗技術(shù)，分別記錄不同時間點的L-和T-型鈣通道電流。 結(jié)果 　　1.白藜三醇對培養(yǎng)豚鼠心室肌細胞L-型鈣電流密度的作用　　(1)培養(yǎng)72h時，RES 30μM和RES 100μM使Ica-L

5、密度分別下降13％和27％，呈現(xiàn)出濃度依賴性抑制趨勢，RES 100μM組與對照組之間有統(tǒng)計學差異(2.54±0.35 pA/pF vs.3.48±0.42 pA/pF,P<0.05)； (2)RES 10μM，RES 30μM和RES 100μM對Ica-L密度的抑制作用呈現(xiàn)時間依賴性，RES 100μM在72h和24h之間有統(tǒng)計學差異(2.54±0.35 pA/pF vs.3.33±0.48 pA/pF,P<0.05)；

6、 2.白藜三醇對培養(yǎng)豚鼠心室肌細胞T-型鈣電流密度的作用(1)T-型鈣電流密度在同一作用時間點呈現(xiàn)出隨著白藜三醇濃度的增大，電流呈減少趨勢，在72h時，RES 100μM組與對照組之間有統(tǒng)計學差異(2.61±0.64.10pA/pF vs.4.79±0.67 10pA，pF，P<0.05)； (2)同一濃度的白藜三醇在不同作用時間點(24h，48h，72h)，T-型鈣電流密度均呈現(xiàn)出隨著時間的延長而減少的趨勢，但未顯示出統(tǒng)計