IL-12單克隆抗體阻斷DC上清誘導FBL-3細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的：建立體外培養(yǎng)擴增C57BL/6小鼠樹突狀細胞（dendritic cell，DC）的方法；應用反復凍融法制備小鼠紅白血病FBL-3腫瘤細胞抗原并致敏DC：觀察致敏DC培養(yǎng)上清對小鼠紅白血病細胞FBL-3的誘導分化作用；觀察IL-12單克隆抗體阻斷致敏DC培養(yǎng)上清對小鼠紅白血病細胞FBL-3的誘導分化作用；進而探討DC培養(yǎng)上清誘導白血病細胞分化作用的機制，為白血病的誘導分化治療提供一條新的途徑。 方法：①應用1ng/ml白介

2、素-4（interleukin，IL-4）和10ng/ml粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor，GM-CSF）聯(lián)合誘導培養(yǎng)C57BL/6小鼠骨髓細胞，光鏡和電鏡觀察DC發(fā)育過程中形態(tài)學變化；流式細胞術檢測DC表面分子CD80、CD86、H-2Kb及I-Ab的表達情況；②常規(guī)培養(yǎng)并收集C57BL/6小鼠誘導的紅白血病FBL-3細胞，反復凍融FBL-3

3、細胞制備腫瘤抗原，收集備用；③制備的FBI-3腫瘤抗原與培養(yǎng)的C57BL/6小鼠DC共孵育，致敏DC：④用ELISA法檢測致敏DC第8天培養(yǎng)上清中IL-12的濃度（細胞濃度2．0×106/ml）；⑤分四組：標準IL-12組（陽性對照組，A組），致敏DC第8天的培養(yǎng)上清組（致敏DC組，B組），加入IL-12單克隆抗體的致敏DC第8天的培養(yǎng)上清組（阻斷實驗組，C組），RPMI-1640組（陰性對照組，D組）。四組分別與FBL-3細胞共孵育7

4、2小時后，用瑞氏染色計數(shù)成熟單核細胞、透射電鏡觀察成熟細胞的超微結構、流式細胞儀檢測細胞表面CD14分子的陽性表達率，觀察四組有何不同。 結果：①用IL-4和GM-CSF聯(lián)合培養(yǎng)C57BIL/6小鼠骨髓細胞，可得到符合DC特征的典型細胞；②ELISA法檢測致敏DC培養(yǎng)第8天DC（細胞濃度2．0×106/ml）上清中IL-12的濃度為：（699．77±16．67）pg/ml；③瑞氏染色計數(shù)成熟單核細胞的比率：陰性對照組轉化率為（3

5、．06±1．41）％，阻斷實驗組單核細胞比率為（17．11±1．25）％，兩者比較P<0．05；致敏DC組單核細胞比率為（46．03_+2．41）％，與陰性對照組和阻斷實驗組比較P均<0．05；陽性對照組單核細胞比率（48．07±1．96）％，與陰性對照組和阻斷實驗組比較P均<0．05，與致敏DC組比較P>0．05；④透射電鏡計數(shù)成熟單核細胞的比率與瑞氏染色計數(shù)成熟單核細胞的比率基本相同；⑤流式細胞儀分析顯示：陰性對照組細胞基本無CD1

6、4表達，表達率為（3．24±1．39）％；陽性對照組、致敏DC組、阻斷試驗組作用后均有部分細胞表達CD14分子，CD14陽性率分別為（49．39±1．88）％、（48．28±1．10）％、（18．02±0．92）％。致敏DC組和陽性對照組比較P>0．05：致敏DC組、陽性對照組分別與陰性對照組、阻斷試驗組比較P<0．05；阻斷試驗組與陰性對照組比較P<0．05。 結論：①應用IL-4聯(lián)合GM．CSF培養(yǎng)小鼠骨髓細胞，可大量擴增成