1型糖尿病小鼠胰島細(xì)胞、淋巴細(xì)胞表達(dá)的改變及血清Ins、TNF-α、IL-10水平變化的研究.pdf

1、目的:研究1型糖尿病(type1diabetesmellitus,T1DM)小鼠胰島B細(xì)胞、A細(xì)胞、白細(xì)胞介素-5(interleukin-5,IL-5)陽(yáng)性細(xì)胞、CD3、CD57陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)改變及血清中胰島素(insulin,Ins)、腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor,TNF)-α、IL-10水平的變化,為進(jìn)一步探討T1DM發(fā)病機(jī)制及為臨床治療提供依據(jù)。
　　方法:正常雄性C57BL/6J小鼠104只,隨機(jī)分

2、為3組:實(shí)驗(yàn)組、鹽水對(duì)照組和正常對(duì)照組。1.模型建立:采用連續(xù)多次小劑量鏈脲佐菌素給藥法(multiplelow-doseofstreptozotocin,MLDSTZ)。分別于注射后第3d、7d、10d、14d、21d及28d檢測(cè)小鼠的空腹血糖、體重。2.取血清及胰腺組織,應(yīng)用免疫組織化學(xué)SABC單染、鄰片單染雙標(biāo)記、圖像分析、形態(tài)計(jì)量法及酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)進(jìn)行

3、研究。
　　結(jié)果:1.與正常及鹽水對(duì)照組比較,小鼠空腹血糖水平從實(shí)驗(yàn)14d組開始明顯升高(P﹤0.01),以28d組最高;實(shí)驗(yàn)組小鼠的體重與對(duì)照組比較無顯著性差異。2.實(shí)驗(yàn)組胰島面積有所減小。胰島B細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)10d、14d、21d組染色加深,免疫反應(yīng)強(qiáng)度增強(qiáng),平均灰度值降低(P﹤0.01);B細(xì)胞的面數(shù)密度(NA)從第7d開始減小,呈逐漸下降趨勢(shì),與正常及鹽水對(duì)照組比較有顯著性差異(P﹤0.01)。3.胰島A細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)7d、21d

4、、28d組免疫染色強(qiáng)度有所減弱,平均灰度值升高(P﹤0.05);7d以后細(xì)胞NA增大,與正常及鹽水對(duì)照組比較有顯著性差異(P﹤0.01);A細(xì)胞除分布于胰島周邊,也可見于胰島中央。4.胰島IL-5陽(yáng)性細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)3d、7d組免疫染色強(qiáng)度有所減弱,平均灰度值升高(P﹤0.01),其余時(shí)間點(diǎn)無明顯變化。IL-5陽(yáng)性細(xì)胞的NA及分布的變化與A細(xì)胞基本一致。經(jīng)鄰片單染雙標(biāo)法顯示,胰島中多數(shù)IL-5陽(yáng)性細(xì)胞與A細(xì)胞位置相同。5.CD3陽(yáng)性細(xì)胞散在分

5、布于胰島內(nèi),實(shí)驗(yàn)3d開始NA逐漸增大,以14d組最大,之后有所減小,除28d組外,均大于對(duì)照組,比較有顯著性差異(P﹤0.01)。6.正常及鹽水對(duì)照組CD57陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于胰島周邊,實(shí)驗(yàn)組CD57陽(yáng)性細(xì)胞除分布于胰島周邊,還可見于胰島中央。NA從實(shí)驗(yàn)3d開始增大,以14d組最大,之后有所減小,均高于對(duì)照組,比較有顯著性差異(P﹤0.01)。7.ELISA法檢測(cè)血清結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,血清Ins濃度從實(shí)驗(yàn)7d后均處于較低水平;實(shí)驗(yàn)

6、組血清TNF-α濃度處于下降趨勢(shì)但均高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05);實(shí)驗(yàn)組IL-10濃度較對(duì)照組顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)。
　　結(jié)論:1.成功制備T1DM小鼠模型。2.T1DM發(fā)生時(shí),實(shí)驗(yàn)組胰島面積有所減小,表達(dá)Ins的B細(xì)胞數(shù)量減少,合成和分泌Ins總量減少,Ins表達(dá)下調(diào),血清Ins水平下降。3.胰島A細(xì)胞和IL-5陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量增多,變化趨勢(shì)相似,IL-5定位于胰島A細(xì)胞。胰高血糖素(glu