生物標(biāo)志物p53與miRNA的表面等離子體激元共振檢測(cè).pdf

1、表面等離子體激元共振(SPR)是一種基于物質(zhì)相互作用引起芯片表面折射率或厚度變化而進(jìn)行檢測(cè)的光學(xué)技術(shù),它是研究生物分子間相互作用的有力工具,具有實(shí)時(shí)、靈敏度高、免標(biāo)記以及樣品無(wú)需純化等優(yōu)點(diǎn),在蛋白及核酸等生物分子檢測(cè)方面具有廣闊的應(yīng)用前景。本文利用SPR技術(shù)的優(yōu)勢(shì)對(duì)兩種生物標(biāo)志物p53蛋白和miRNA進(jìn)行了檢測(cè)。
　　 首先,利用雙通道SPR技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對(duì)癌細(xì)胞溶胞液中野生型及總p53蛋白(野生型與突變型p53蛋白的總和)的高靈敏

2、檢測(cè)。將捕獲野生型p53的一致性雙鏈DNA以及特異性識(shí)別總p53蛋白的單克隆抗體分別組裝到SPR芯片的兩個(gè)通道上,通過(guò)流動(dòng)注射p53蛋白的溶液,從而檢測(cè)野生型及總p53蛋白的濃度水平。由于p53蛋白和一致性雙鏈DNA以及單克隆抗體具有高度的親和性,所以可檢測(cè)極低濃度的p53蛋白水平。野生型及總p53蛋白所對(duì)應(yīng)的SPR信號(hào)的差減可直接反應(yīng)不同類型癌細(xì)胞中p53的突變量。同一SPR芯片上野生型與突變型p53蛋白的同時(shí)測(cè)定消除了以往不同方法、

3、不同技術(shù)檢測(cè)的不確定性。此外,該方法簡(jiǎn)單、無(wú)需對(duì)樣品進(jìn)行標(biāo)記,克服了傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附分析操作步驟煩瑣、且使用酶標(biāo)抗體的缺陷,為臨床上癌癥的預(yù)警及早期診斷提供了理論依據(jù)。
　　 miRNA是一組含有19～25個(gè)核苷酸的非編碼小RNA。利用SPR技術(shù)免標(biāo)記、高靈敏的特點(diǎn),采用類似免疫競(jìng)爭(zhēng)的方式,即表面固定的miRNA探針與miRNA靶基因及生物素標(biāo)記的miRNA(biotin-miRNA)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)雜交反應(yīng),隨后流動(dòng)注射納米金粒子標(biāo)