犬cyclinD1的抗體制備及聯(lián)合p27kip抗體在犬乳腺腫瘤中的應(yīng)用.pdf

1、CyclinD1是cyclin家族中促細(xì)胞周期由G1期到S期的重要因子，被視作生長(zhǎng)因子感受器。在G1期表達(dá)達(dá)到最高，具有周期依賴性，可激活CDK4或CDK6形成復(fù)合物，對(duì)細(xì)胞周期起正向調(diào)控作用。它的異?？蓪?dǎo)致細(xì)胞周期的紊亂，促進(jìn)細(xì)胞大量增殖。P27kip是細(xì)胞周期素依賴性激酶抑制因子KIP家族的重要成員之一，可抑制多種cyclin/CDK復(fù)合物的活性，對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)行負(fù)調(diào)控。同時(shí)它也發(fā)揮著介導(dǎo)抑制性細(xì)胞因子反應(yīng)，促進(jìn)分化，增加細(xì)胞間粘附的

2、作用。p27kip是多種腫瘤中獨(dú)立的預(yù)后因子可作為臨床診斷的標(biāo)志。鑒于這兩種基因的在腫瘤發(fā)生與抑制方面的重要，為了解犬乳腺腫瘤中cyclinD1與p27kip在基因與蛋白的過(guò)表達(dá)情況及相互關(guān)系，進(jìn)一步了解這兩種蛋白的生物學(xué)特性及其在臨床診斷方面上的應(yīng)用價(jià)值，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)原核表達(dá)技術(shù)制備犬cyclinD1多克隆抗體，并本實(shí)驗(yàn)室已有p27kip抗體，作其在犬乳腺腫瘤細(xì)胞系CHMp、CHMm中及臨床標(biāo)本中的表達(dá)情況進(jìn)行研究。
　　結(jié)果:1

3、、在對(duì)兩種細(xì)胞系中的兩種基因檢測(cè)結(jié)果顯示，cyclinD1與p27kip的mRNA的含量在不同的細(xì)胞系中情況有差異。CyclinD1在不同細(xì)胞系中的mRNA含量間有極顯著性差異(p＜0.01)，且同正常乳腺的差異極顯著(p＜0.01);p27kip在兩種細(xì)胞系中的mRNA無(wú)顯著性差異，但同正常乳腺中的有極顯著性差異(p＜0.01);cyclinD1與p27kip在相同的細(xì)胞系中的mRNA的含量差異是極顯著的(p＜0.01)。2、cycl

4、inD1抗體包涵體表達(dá)，在未活化包涵體的情況下成功制備犬cyclinD1抗體，通過(guò)檢測(cè)該抗體擁有良好的反應(yīng)原性，抗體效價(jià)較高(1∶25600)。3、應(yīng)用自備抗體檢測(cè)兩種細(xì)胞系的兩種蛋白表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，CyclinD1在不同細(xì)胞系中的蛋白表達(dá)含量有極顯著性差異(p＜0.01)，且同正常乳腺的差異極顯著(p＜0.01);p27kip在兩種細(xì)胞系中的蛋白表達(dá)有顯著性差異(p＜0.01)，且同正常乳腺中的有極顯著性差異(p＜0.01);cycli

5、nD1與p27kip在相同的細(xì)胞系中的蛋白表達(dá)的含量差異是極顯著的(p＜0.01)。4、對(duì)臨床收集的84例犬乳腺腫瘤進(jìn)行病理分類得到有良性腫瘤\導(dǎo)管內(nèi)癌\浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌\浸潤(rùn)性小葉癌\黏液癌\髓樣癌伴隨淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)\混合樣癌，通過(guò)免疫組化法對(duì)cyclinD1與p27kip蛋白表達(dá)情況結(jié)果分析出其陽(yáng)性表達(dá)率。cyclinD1在兩種腫瘤中的表達(dá)情況差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.005)，但良性與惡性腫瘤與正常乳腺組織相比有顯著性差異(p＜0.

6、01)。P27kip在腫瘤與正常組織比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。各類型腫瘤間的比較情況顯示，cyclinD1在浸潤(rùn)性小葉癌與導(dǎo)管內(nèi)癌腫瘤組織間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，p27kip在混合樣癌與導(dǎo)管內(nèi)癌的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。cyclinD1與p27kip間存在相關(guān)性。
　　結(jié)論:盡管cyclinD1與p27kip的檢測(cè)通過(guò)不同的方法其檢測(cè)結(jié)果有差異，但均對(duì)犬乳腺腫瘤的診斷有指導(dǎo)意義;cyclinD1