真核表達質(zhì)粒EX-Y2069-M29的構(gòu)建并檢測LRP16蛋白在人子宮內(nèi)膜癌HEC-1-B細胞中的表達.pdf

1、目的:構(gòu)建LRP16基因真核表達質(zhì)粒EX-Y2069-M29,為將其轉(zhuǎn)染人子宮內(nèi)膜癌HEC-1-B細胞,建立穩(wěn)定表達L HEC-1-B RP16蛋白的細胞株,并檢測LRP16蛋白在人子宮內(nèi)膜癌HEC-1-B細胞中的表達。方法:采用PCR逆轉(zhuǎn)錄cDNA擴增LRP16基因全長,亞克隆到真核表達載體pReceiver-M29內(nèi),構(gòu)建出重組真核表達質(zhì)粒EX-Y2069-M29,酶切及DNA測序證實重組質(zhì)粒EX-Y2069-M29正確插入LRP1

2、6的核苷酸序列。脂質(zhì)體法將EX-Y2069-M29轉(zhuǎn)染HEC-1-B細胞,并用Western blot免疫印跡法檢測在人子宮內(nèi)膜癌HEC-1-B細胞中LRP16蛋白表達。結(jié)果:1、LRP16基因總RNA在提取進程中沒有發(fā)生明顯的降解,說明總獲得的RNA和mRNA完整。PCR擴增后的產(chǎn)物在約980bp處出現(xiàn)明顯的特異性條帶,與理論預(yù)計的cDNA片段長度一致。2、LRP16基因真核表達質(zhì)粒EX-Y2069-M29成功構(gòu)建,重組質(zhì)粒EX-Y2

3、069-M29經(jīng)酶切和測序鑒定,表明均含有大小正確的LRP16基因片段。3、Western blot免疫印跡法檢測在人子宮內(nèi)膜癌HEC-1-B細胞中LRP16蛋白表達?？瞻讓φ战M和EX-NEG-M29組LRP16蛋白相對表達量比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；EX-Y2069-M29組與空白對照組LRP16蛋白相對表達量比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；EX-Y2069-M29組與EX-NEG-M29組LRP16蛋白相對表達