肺癌惡性胸腔積液中樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)及生物學(xué)特性.pdf

1、目的從肺癌惡性胸腔積液中體外誘導(dǎo)培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞(Dendriticcell，DC)，通過對(duì)其形態(tài)、表面分子表達(dá)及生物學(xué)功能的研究，探討其在免疫治療中可能的價(jià)值。 方法收集l5例肺癌患者的惡性胸腔積液，密度梯度離心后貼壁獲取DC前體，以GM-CSF(粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子)、IL-4和TNF-a(腫瘤壞死因子一α)誘導(dǎo)培養(yǎng)，以6例健康志愿者外周血單核細(xì)胞來源的DC為對(duì)照。倒置顯微鏡觀察形態(tài)變化；FITC-Dextran吞噬實(shí)驗(yàn)

2、評(píng)價(jià)其對(duì)抗原的攝取能力；流式細(xì)胞儀分析誘導(dǎo)培養(yǎng)DC的表型；同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)通過MTT法測定；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測DC培養(yǎng)上清中IL-10和IFN-y的含量；流式細(xì)胞術(shù)分析DC刺激后惡性胸腔積液中淋巴細(xì)胞表型的變化。MTT法檢測DC刺激的胸腔積液中淋巴細(xì)胞對(duì)肺癌細(xì)胞株A549的細(xì)胞毒作用。 結(jié)果(1)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)后，惡性胸腔積液中的DC呈典型的樹突狀形態(tài)。(2)誘導(dǎo)d9，高表達(dá)HLA-DR(93．44-3．

3、1)％、CD80(87．24-14．8)％、CD86(92．14-2．9)％、CD83(53．84-11．3)％和CDla(41．44-18．4)％，較培養(yǎng)d6的DC明顯升高(P<0．05)，為典型成熟DC表型；而正常健康對(duì)照DC各表型為HLA-DR(91．64-2．7)％、CD80(91．94-3．9)％、CD86(95．44-2．2)％、CD83(55．92：7．2)％、CDla(51．24-5．9)％，二者比較無明顯差異(P>0．

4、05)。(3)惡性胸腔積液來源的DC以GM-CSF和IL-4誘導(dǎo)培養(yǎng)6天，對(duì)FITC-Dextran的攝取率較高，為(76．84-18．8)％，而經(jīng)TNF-ot誘導(dǎo)后攝取率為(25．64-8．4)％，抗原攝取能力明顯下降(P＜0．05)。(4)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)顯示，惡性胸腔積液來源的DC有較強(qiáng)的同種異體淋巴細(xì)胞激發(fā)能力，刺激指數(shù)(stimulationindex,SI)在效靶比為l：20時(shí)為6．94-1．2，l：10時(shí)為8．4+1．5，

5、與正常對(duì)照DC相比無明顯差異(P>o．05)，且SI隨DC與淋巴細(xì)胞比例的增加而增高。(5)成熟DC上清中Thl型細(xì)胞因子IFN-7濃度明顯增高(P<0．01)，而Th2型細(xì)胞因子IL-10濃度顯著降低(P＜O．01)，具有促Thl活性。(6)惡性胸腔積液中的淋巴細(xì)胞低表達(dá)CD25(8．4~4．6)％和CD69(40．24-9．7)％，經(jīng)自身DC刺激后，CD25(38．54-7．1)％和CD69(78．9-t11．4)％的表達(dá)量明顯上調(diào)

6、(P<0．05)，說明體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的DC可活化自身淋巴細(xì)胞。(7)凋亡A549負(fù)載DC激發(fā)的惡性胸腔積液中淋巴細(xì)胞對(duì)A549殺傷率為(42．1+7．6)％，明顯高于未負(fù)載DC刺激的淋巴細(xì)胞對(duì)A549殺傷率(15．54-4．3)％(P<0．05)。 結(jié)論聯(lián)合應(yīng)用GM-CSF、IL-4和TNF-(I，可以從肺癌惡性胸腔積液中誘導(dǎo)出形態(tài)、表型和免疫功能正常的DC。DC成熟后可改變Thl／Th2型細(xì)胞因子平衡，具有Thl極性，且能刺激自