苦豆堿腸溶膠囊的研制.pdf

1、潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis，UC)是一種發(fā)病原因不明的慢性非特異性炎癥疾病，病變部位主要位于結(jié)腸黏膜層，與免疫、遺傳、感染、環(huán)境等多種因素有關(guān)，以腹瀉、腹痛、黏液膿血便和里急后重為主要臨床癥狀，主要病理特點(diǎn)為結(jié)腸黏膜慢性炎癥及潰瘍形成[1]。流行病學(xué)研究表明，UC的年發(fā)病率為2～20/10萬，患病率為50～100/10萬，好發(fā)于15～30歲人群。近年來隨著人們生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)及生活方式的改變，該病在我國的

2、發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)。由于UC病程長，病情輕重不一，常反復(fù)發(fā)作，患者生活質(zhì)量嚴(yán)重受限，且長期患者中有5～10％發(fā)生癌變，臨床至今尚無有效的治療措施，被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一。
　　 目前西醫(yī)對(duì)UC的治療以化學(xué)藥物為主，主要有柳氮磺胺類、糖皮質(zhì)激素類和免疫抑制劑等，效果都不夠理想，且副作用較大。其中柳氮磺胺吡啶(SASP)是目前臨床最常用的藥物，適用于輕、中度及慢性UC患者，該藥治療UC的有效率較低，每日服藥4g以內(nèi)，連

3、續(xù)一個(gè)月，有效率不及50％，而副作用可達(dá)37.5％，且復(fù)發(fā)率為33％。該藥療效及副作用與用量成正比，約有10～15％患者因皮疹、胃腸不適等副作用而停藥。中醫(yī)治療UC則根據(jù)不同分型辯證施治，或清熱利濕，或健脾和胃，或行氣活血;以內(nèi)服湯藥為主，輔以灌腸。內(nèi)服藥味多，質(zhì)量不易控制，療效得不到保障;灌腸給藥患者順應(yīng)性差，醫(yī)務(wù)人員工作量大，應(yīng)用極為不方便。
　　 苦豆堿(aloperine)是從豆科植物苦豆子(Sophora alopec

4、uroides L.)中提取分離的單體有效成分。該化合物為無色棱柱狀結(jié)晶，熔點(diǎn)71～73℃，旋光度[α]D+86.59º，具有明顯的抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、抗癌、抗病毒、抗菌及抗心律失常等作用。研究表明苦豆堿對(duì)多種致炎劑引起的急性炎癥和Ⅲ、Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)及佐劑關(guān)節(jié)炎均有顯著的抑制作用，其抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)作用不依賴于垂體一腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)，主要與其抑制白細(xì)胞(WBC)游走，穩(wěn)定溶酶體膜，促進(jìn)自由基清除，抑制淋巴細(xì)胞增殖和前列腺素(Prost

5、aglandin，PG)、組胺、淋巴因子等炎癥介質(zhì)的合成、釋放及致炎活性有關(guān)。
　　 本課題組前期進(jìn)行了苦豆堿對(duì)葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium，DSS）致急性期小鼠UC模型的治療作用及機(jī)制研究，結(jié)果顯示苦豆堿能使結(jié)腸炎小鼠腹瀉、便血等體征顯著減輕，腸黏膜炎癥狀態(tài)明顯緩解，疾病活動(dòng)數(shù)(diseaseactivity index)DAI值和組織學(xué)評(píng)分均低于模型組(P＜0.01)，表明苦豆堿對(duì)DSS致小鼠急

6、性UC具有較好的療效。其機(jī)制可能與抑制結(jié)腸組織核因子(NF-κBp65)表達(dá)、降低促炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6表達(dá)以及提高抗炎因子IL-4水平有關(guān)。目前，課題組已向國家專利局申請(qǐng)名為“苦豆堿在制備治療UC藥物中的應(yīng)用”的一項(xiàng)發(fā)明專利(受理號(hào):200910192776.7)。
　　 目前市面上尚無有效的治療UC藥物，臨床最常用的是SASP，其有效率不及50％，而副作用可達(dá)37.5％，且復(fù)發(fā)率為33％?？喽箟A作為一個(gè)新型的抗U

7、C藥物，具有療效確切、副作用低等優(yōu)點(diǎn)，外加我國十分豐富的苦豆子資源，有著廣闊的市場(chǎng)應(yīng)用前景。
　　 腸溶制劑具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):①避免藥物被胃酸和胃內(nèi)酶類破壞，增加藥物穩(wěn)定性;②避免藥物對(duì)胃黏膜產(chǎn)生強(qiáng)烈的刺激作用，引起惡心、嘔吐等不良反應(yīng);③將藥物傳遞至腸道發(fā)揮局部治療作用;④提高局部藥物濃度;⑤延緩藥物吸收的作用。在前期對(duì)苦豆堿治療UC的藥理作用研究基礎(chǔ)上，本課題擬將苦豆堿開發(fā)成治療UC的腸溶膠囊。具有掩蓋苦豆堿的苦味;避免苦豆

8、堿對(duì)胃黏膜的刺激;腸道的pH環(huán)境利于苦豆堿的吸收等作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)寧夏鹽池縣主產(chǎn)區(qū)的苦豆子不同部位（葉、莖、花、豆莢、種子）中苦豆堿含量進(jìn)行測(cè)定，為提取分離苦豆堿最佳藥材部位的選擇提供參考;其次對(duì)苦豆堿腸溶膠囊進(jìn)行研制，包括制備工藝、中試試驗(yàn)、建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)、制劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)，旨在為后期工業(yè)化生產(chǎn)提供相關(guān)的數(shù)據(jù)資料。
　　 1目的:
　　 通過對(duì)苦豆堿提取方法和檢測(cè)條件的研究，對(duì)苦豆子不同部位（葉、莖

9、、花、豆莢、種子）中苦豆堿含量進(jìn)行測(cè)定，為提取分離苦豆堿最佳藥材部位的選擇提供參考;綜合考察吸濕百分率、休止角、堆密度及體外釋放度等指標(biāo)，確定苦豆堿腸溶膠囊最佳的處方組成和制備工藝;通過對(duì)處方臨界相對(duì)濕度的測(cè)定，為制劑生產(chǎn)過程中車間濕度的控制提供參考;進(jìn)行三批中試試驗(yàn)，驗(yàn)證制劑工藝的可行性;建立苦豆堿腸溶膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);對(duì)苦豆堿腸溶膠囊進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，探討影響藥物穩(wěn)定性的因素，為制劑生產(chǎn)、運(yùn)輸、貯存過程中環(huán)境條件控制和包裝材料的選擇以及

10、有效期的制定提供依據(jù)。
　　 2方法:
　　 2.1苦豆子不同部位中苦豆堿的含量測(cè)定
　　 采用HPLC法，以苦豆堿含量為指標(biāo)，考察提取溶劑、提取方法、提取次數(shù)及提取時(shí)間等因素對(duì)提取效率的影響，優(yōu)化苦豆堿的提取方法。同時(shí)對(duì)測(cè)定方法進(jìn)行方法學(xué)考察，包括線性關(guān)系考察、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性及加樣回收率試驗(yàn)等。
　　 2.2苦豆堿腸溶膠囊制備工藝研究
　　 采用固定漏斗法測(cè)定不同處方的休止角，采用量筒法

11、測(cè)定不同處方的堆密度，采用槳法對(duì)不同處方進(jìn)行體外釋放度考察，同時(shí)對(duì)不同處方吸濕百分率進(jìn)行測(cè)定，綜合上述試驗(yàn)結(jié)果，確定最佳的輔料和配比。測(cè)定已確定處方的臨界相對(duì)濕度，為生產(chǎn)過程中車間的濕度控制提供參考。在《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》(GMP)要求的設(shè)備和實(shí)驗(yàn)條件下，以10倍處方的投料量進(jìn)行三批中試試驗(yàn)，并對(duì)中試樣品的成品率、裝量差異和含量均勻度進(jìn)行考察。
　　 2.3苦豆堿腸溶膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立
　　 采用薄層色譜法(TLC)

12、鑒別苦豆堿;采用HPLC法測(cè)定苦豆堿的含量;采用HPLC法對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢查，通過破壞性試驗(yàn)對(duì)檢測(cè)方法的專屬性進(jìn)行考察;采用槳法在pH1.2、6.8的溶出介質(zhì)中進(jìn)行藥物體外釋放度考察，并制定苦豆堿腸溶膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　 2.4苦豆堿腸溶膠囊的穩(wěn)定性試驗(yàn)
　　 影響因素試驗(yàn):取一批去除外包裝的制劑，分別在高溫(60℃)、高濕度(25℃，RH90±5％)、強(qiáng)光照射(4500±5001x)條件下放置10天，在第0、5、10

13、天取樣檢測(cè)，重點(diǎn)考察外觀性狀、有關(guān)物質(zhì)、含量以及溶出度有無顯著變化。
　　 加速試驗(yàn):取三批按市售包裝（塑料瓶包裝）包裝的制劑，在40±2℃、RH75±5％條件下放置6個(gè)月，分別在第0、1、2、3、6個(gè)月末取樣檢測(cè)，重點(diǎn)考察外觀性狀、有關(guān)物質(zhì)、含量以及溶出度有無顯著變化。
　　 長期試驗(yàn):取三批按市售包裝（塑料瓶包裝）包裝的制劑，在25±2℃、RH60±10％條件下放置12個(gè)月，分別在第0、3、6、9、12個(gè)月取樣檢測(cè)，

14、重點(diǎn)考察外觀性狀、有關(guān)物質(zhì)、含量以及溶出度有無顯著變化。將結(jié)果與0月比較，以確定藥品的有效期。由于試驗(yàn)數(shù)據(jù)的分散性，一般應(yīng)按95％可信限進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得出合理的有效期。
　　 3結(jié)果:
　　 3.1苦豆子不同部位中苦豆堿的含量測(cè)定
　　 苦豆堿的最佳提取條件為氨水浸潤30min，甲醇超聲提取30min?？喽棺尤~、莖中苦豆堿的含量分別為0.38％、0.02％，豆莢、花、種子中不含苦豆堿。
　　 3.2苦豆堿

15、腸溶膠囊制備工藝研究
　　 淀粉、微晶纖維素與苦豆堿的混合物吸濕率最低，當(dāng)苦豆堿∶淀粉∶微晶纖維素=10∶15∶5時(shí)，藥物2h內(nèi)在酸液(pH=1.2)中沒有溶出，45min內(nèi)在緩沖液(Ph=6.8)中釋放量為99.24％，平均休止角為29.5°，平均堆密度為0.3640 g/ml?？喽箟A腸溶膠囊的最終處方為:苦豆堿(67g)、淀粉(100g)、微晶纖維素(33g)，混合均勻后，裝入腸溶空心膠囊，制成1000粒。三批中試樣品的成品

16、率分別為94.6％、93.1％和94.9％，裝量差異及含量均勻度檢查均符合要求。
　　 3.3苦豆堿腸溶膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立
　　 苦豆堿腸溶膠囊中苦豆堿的薄層鑒別，斑點(diǎn)清晰（Rf=0.69），具有專屬性。采用HPLC法測(cè)定苦豆堿腸溶膠囊中苦豆堿的含量，方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明，方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。采用HPLC法對(duì)破壞樣品產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，各雜質(zhì)與主成分分離效果較好，說明方法具有專屬性。體外釋放度試驗(yàn)表明，三批樣品2

17、h內(nèi)在pH為1.2的溶出介質(zhì)均無溶出，45min內(nèi)在pH為6.8的溶出介質(zhì)中的釋放量分別為99.58％、99.44％、98.01％，符合相關(guān)規(guī)定。
　　 3.4苦豆堿腸溶膠囊影響因素試驗(yàn)、加速穩(wěn)定性以及長期穩(wěn)定性試驗(yàn)
　　 影響因素試驗(yàn)表明，苦豆堿腸溶膠囊在高溫、高濕、強(qiáng)光照射下放置10天后，與第0天相比，外觀性狀、含量、有關(guān)物質(zhì)、酸中及緩沖液中釋放量均無顯著變化。
　　 加速穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，三批苦豆堿腸溶膠囊在

18、40±2℃、RH75±5％條件下放置6個(gè)月后，與第0天相比，外觀性狀、含量、有關(guān)物質(zhì)、酸中及緩沖液中釋放量均無顯著變化。
　　 6個(gè)月的長期穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果顯示，三批苦豆堿腸溶膠囊在25±2℃、RH60±10％條件下放置6個(gè)月后，與第0天相比，外觀性狀、含量、有關(guān)物質(zhì)、酸中及緩沖液中釋放量均無顯著變化。
　　 4結(jié)論:
　　 所建立的高效液相色譜方法準(zhǔn)確、穩(wěn)定、重復(fù)性好，可以作為苦豆子中苦豆堿的含量測(cè)定方法;苦豆子