化學(xué)去細(xì)胞異體及異種神經(jīng)移植相關(guān)免疫因素的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過(guò)對(duì)化學(xué)去細(xì)胞神經(jīng)組織學(xué)和移植后的相關(guān)免疫學(xué)因素的研究證實(shí)經(jīng)化學(xué)萃取的去細(xì)胞異體及異種神經(jīng)用于周圍神經(jīng)缺損修復(fù)的可行性，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)根據(jù)。 材料和方法:在第一部分實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行了化學(xué)去細(xì)胞神經(jīng)移植物的制備，其中包括同種異體及異種神經(jīng)的取材及化學(xué)萃取處理，然后對(duì)其進(jìn)行組織學(xué)研究。我們?cè)?0只C57BL/6小鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng)上取直徑0.3mm，長(zhǎng)1.5cm的40條神經(jīng)，并在7只新西蘭大白兔的雙側(cè)前臂尺神經(jīng)上切取直徑0.3m

2、m，長(zhǎng)1.5cm的38條尺神經(jīng)，其中2條新鮮神經(jīng)留作組織學(xué)研究的對(duì)照。將兩組神經(jīng)以TritonX-100和脫氧膽酸鈉溶液進(jìn)行去細(xì)胞化學(xué)萃取處理。處理后神經(jīng)進(jìn)行保存以作為第二部分實(shí)驗(yàn)的神經(jīng)移植物并留下經(jīng)去細(xì)胞處理過(guò)的新西蘭大白兔神經(jīng)2條進(jìn)行組織學(xué)研究。隨后對(duì)2條新鮮異種神經(jīng)與經(jīng)化學(xué)萃取處理的2條異種神經(jīng)制作切片進(jìn)行組織學(xué)觀察，包括：HE染色、髓鞘染色、層粘連蛋白免疫組化染色及纖維素染色。 在第二部分實(shí)驗(yàn)中，在前面進(jìn)行化學(xué)去細(xì)胞神經(jīng)

3、移植物的制備基礎(chǔ)上，通過(guò)植入不同類型的小鼠同種異體和異種神經(jīng)，觀察移植后免疫排斥中脾臟T細(xì)胞的總數(shù)與亞群、部分相關(guān)淋巴因子等相關(guān)免疫因素的變化。192只BALB/C小鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組、新鮮自體神經(jīng)移植組、新鮮同種異體神經(jīng)移植組、新鮮異種神經(jīng)移植組、化學(xué)去細(xì)胞同種異體神經(jīng)移植組和化學(xué)去細(xì)胞異種神經(jīng)移植組各32只。每組小鼠股部植入相應(yīng)類型的神經(jīng)。然后分別在神經(jīng)植入術(shù)后3、7、14、28天把各組的8只小鼠取出脾臟、剪碎、磨勻、裂解、離心，對(duì)

4、每組每只小鼠的淋巴細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。用FITC特異性熒光標(biāo)記的CD3、CD4、CD8單克隆抗體作用后，F(xiàn)ACS流式細(xì)胞儀檢測(cè)，計(jì)數(shù)10，000個(gè)淋巴細(xì)胞，得到T淋巴細(xì)胞及其亞群百分?jǐn)?shù)；同樣，用FITC特異性熒光標(biāo)記的TNF-α、IL-2、IFN-γ，以及PE特異性熒光標(biāo)記的CD25單克隆抗體作用后，F(xiàn)ACS流式細(xì)胞儀檢測(cè)，計(jì)數(shù)10，000個(gè)淋巴細(xì)胞，得到相應(yīng)淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。以所測(cè)的淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)為統(tǒng)計(jì)指標(biāo)，用STATA7.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

5、處理。 結(jié)果:第一部分組織學(xué)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明去細(xì)胞神經(jīng)與新鮮神經(jīng)相比較細(xì)胞和髓鞘被徹底清除，許旺細(xì)胞基底板層保留完好，成為空的神經(jīng)基質(zhì)管。免疫原性成分清除徹底。 第二部分免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)中，化學(xué)去細(xì)胞神經(jīng)同種異體和異種神經(jīng)移植組CD3、CD4、CD8、CD25陽(yáng)性T細(xì)胞率以及IL-2、IFN-γ、TNF-α陽(yáng)性細(xì)胞率與假手術(shù)對(duì)照組、自體神經(jīng)移植組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而新鮮同種異體及異種神經(jīng)移植組在相應(yīng)時(shí)