雌激素、吉非貝齊對載脂蛋白AⅠ基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用的研究.pdf

1、　　目的：觀察雌激素和吉非貝齊對載脂蛋白AⅠ(ApolipoproteinAⅠ，ApoAⅠ)基因轉(zhuǎn)錄活性和表達(dá)的影響，探討ApoAⅠ基因啟動子區(qū)域調(diào)控元件在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用和潛在機(jī)制。　　方法：在體外培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞中，分別加入1，10，20，30μmol/L的雌激素或20，40，50：60μg/ml的吉非貝齊共同孵育24小時，收集細(xì)胞提取RNA及核蛋白；在HepG2細(xì)胞中加入10μmol/L雌激素或40μg/ml吉非貝齊培養(yǎng)

2、1，6，24小時分別提取RNA及核蛋白。RNA采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)方法測定不同劑量及不同時間點(diǎn)的ApoAⅠmRNA表達(dá)。以ApoAⅠ基因啟動子肝特異性增強(qiáng)子的A位點(diǎn)序列為探針，用凝膠電泳遷移率滯后實(shí)驗(yàn)(EMSA)，測定加入雌激素刺激的HepG2細(xì)胞核蛋白提取物與A位點(diǎn)的結(jié)合情況；以ApoAⅠ基因啟動子-77～-45bp(drugreactionelement，DRE)序列為探針，用EMSA實(shí)驗(yàn)測定加入吉非貝齊刺激的HepG2細(xì)胞核蛋

3、白提取物與DRE位點(diǎn)的結(jié)合情況?！　〗Y(jié)論：(1)雌激素在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)ApoAⅠ基因表達(dá)，隨著雌激素劑量的增加和刺激時間的延長，ApoAⅠ的mRNA表達(dá)水平逐漸增加，呈劑量依賴性。雌激素可能通過誘導(dǎo)產(chǎn)生的核轉(zhuǎn)錄因子與ApoAⅠ啟動子區(qū)域的A位點(diǎn)結(jié)合參與基因表達(dá)調(diào)控，增加ApoAⅠ的轉(zhuǎn)錄，這種結(jié)合具有高度的特異性。(2)吉非貝齊同樣在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)ApoAⅠ基因表達(dá)，隨著吉非貝齊劑量的增加和刺激時間的延長，ApoAⅠ的mRNA表達(dá)水平也逐漸