豬源致病性大腸桿菌藥敏檢測及復(fù)方安普霉素、多西環(huán)素抗菌制劑研究.pdf

1、本研究對(duì)采自四川、重慶、湖北等21個(gè)省市規(guī)模化豬場的大腸桿菌病疑似病例糞樣，進(jìn)行了大腸桿菌的分離純化，根據(jù)細(xì)菌生長特性以及革蘭氏染色和鏡檢結(jié)果，初步判定得到大腸桿菌共737株。從各省市隨機(jī)抽取分離株進(jìn)行生化鑒定和致病性試驗(yàn)，得到105株致病性大腸桿菌。采用臨床常用5大類共15種抗生素，對(duì)致病株進(jìn)行藥敏檢測。結(jié)果顯示敏感率較高的是安普霉素(81.9％)，多粘菌素B(80％)，其次是氟苯尼考(70.5％)，大觀霉素(63.8％)：敏感率在2

2、0％以下從低至高依次為四環(huán)素(0％)，氨芐青霉素(3.8％)，恩諾沙星(5.7％)，阿莫西林/棒酸(6.7％)，多西環(huán)素(8.6％)，鏈霉素(9.5％)，環(huán)丙沙星(18.1％)。105株致病株中6重以上(包括6重)耐藥的菌株占85.71％，其中5株菌對(duì)15種受試藥物全部耐藥；無菌株只對(duì)1種抗生素耐藥。對(duì)多重耐藥株的分布進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)四川、重慶、河南、福建、安徽、甘肅、遼寧及廣東抽檢菌株未見有低于6重耐藥株。 基于藥敏檢測的結(jié)果和

3、安普霉素的特點(diǎn)，以其作為主藥，選擇藥敏調(diào)查中敏感率較高，且理論上與安普霉素呈協(xié)同或相加效應(yīng)的抗生素或抗菌增效劑，與其進(jìn)行聯(lián)合藥敏試驗(yàn)，在6種藥物配伍中，多西環(huán)素與安普霉素表現(xiàn)出最強(qiáng)的協(xié)同作用。對(duì)安普霉素、多西環(huán)素及載體設(shè)計(jì)3因素4水平正交試驗(yàn)，確定三者的最佳配比為2:1:2。用大腸桿菌0149標(biāo)準(zhǔn)菌株，5株高耐致病株和10株隨機(jī)抽取的致病株對(duì)配方進(jìn)行抑菌效果驗(yàn)證，得到所選配方對(duì)試驗(yàn)菌株的MIC比安普霉素降低2～4倍；比多西環(huán)素降低2～1

4、6倍：比同配比安普霉素、多西環(huán)素雙藥組合降低1～4倍。 采用改良寇氏法測定所得復(fù)方對(duì)小鼠的半數(shù)致死量，結(jié)果顯示該復(fù)方的LD50為2.16g/kg，LD50的95％可信限為1.70～2.74g/kg，屬于低毒外源化學(xué)物。對(duì)試驗(yàn)組小鼠的體重與對(duì)照組進(jìn)行方差分析，得到除灌服量為777.6mg/kg的實(shí)驗(yàn)組3天后的體重顯著高于對(duì)照組外，其余各組與對(duì)照組無顯著性差異。 對(duì)復(fù)方藥物的含量分析方法進(jìn)行了試驗(yàn)，得到了以甲醇處理，再分別用

5、微生物法和高效液相色譜法測定安普霉素和多西環(huán)素的含量分析方法。試驗(yàn)表明該方法具有良好的專屬性、精密度、回收率和重現(xiàn)性。 對(duì)復(fù)方制劑完整處方中的輔料以及包裝進(jìn)行了優(yōu)化，設(shè)計(jì)以原藥、賦形劑(可溶性淀粉，以葡萄糖對(duì)照)和抗結(jié)塊劑(二氧化硅)作為影響因素的3因素2水平正交試驗(yàn)，分別以塑料袋、鋁箔袋和西林瓶包裝，結(jié)果在加速實(shí)驗(yàn)一個(gè)月后葡萄糖對(duì)照組及可溶性淀粉組中的塑料袋包裝組均出現(xiàn)結(jié)塊變色現(xiàn)象，而其余組在3因素不同用量水平下無明顯差異。