3α-羥類固醇脫氫酶抗體的制備及標(biāo)記.pdf

1、睪丸酮叢毛單胞菌含有降解甾核的關(guān)鍵酶3α-羥類固醇脫氫酶(3α-HSD)，通過(guò)包含許多酶的氧化甾核的復(fù)雜代謝途徑，可以分解類固醇類物質(zhì)。 本研究采用單克隆抗體技術(shù)制備抗3α-HSD單克隆抗體，獲得了高表達(dá)抗3α-HSD的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。主要方法是：將3α-HSD純化后免疫雌性Balb/c小鼠，取其脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，經(jīng)克隆和間接ELISA篩選，獲得3株穩(wěn)定分泌抗3α-HSD單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。經(jīng)

2、過(guò)鑒定：其腹水效價(jià)分別為1×106、1×105、1×104。 采用G蛋白親和層析柱對(duì)腹水進(jìn)行純化，將純化后的腹水單抗分別用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記，制備酶標(biāo)抗體和熒光抗體，并對(duì)該酶標(biāo)抗體和熒光抗體進(jìn)行鑒定。制備所得酶標(biāo)抗體和熒光抗體具有特異性強(qiáng)、敏感性高的特點(diǎn)。我們應(yīng)用本研究制備的酶標(biāo)單克隆抗體建立了雙抗體夾心ELISA方法，對(duì)采集的水源樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，該單克隆抗體顯示了對(duì)類固醇類物質(zhì)的高