HGF基因治療乙酸誘導(dǎo)胃潰瘍大鼠實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：闡明攜帶肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因的減毒沙門氏菌在大鼠胃潰瘍治療中的療效觀察和組織分布規(guī)律，為HGF在胃潰瘍基因治療中的實(shí)際應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：110只Wistar大鼠，雌雄各半，平均體質(zhì)量180g±10 g。其中88只按照參考文獻(xiàn)[27]的方法制備大鼠胃潰瘍模型后，隨機(jī)分成4組：攜帶HGF基因真核表達(dá)質(zhì)粒的減毒沙門氏菌株(Typl-HGF)治療組、攜帶GFP基因真核表達(dá)質(zhì)粒的減毒沙門氏菌株(Typl-GFP)治療組、單純減

2、毒沙門氏菌株(Ty)治療組以及模型對(duì)照組，每組各22只。另22只大鼠為正常對(duì)照組。造模后第3天，將各組陽(yáng)性克隆分別接種于2 mL含卡那霉素的LB培養(yǎng)液中，震蕩過(guò)夜，次日取50 μL加入50mL含卡那霉素的LB培養(yǎng)液中，2 h后收集菌體，PBS清洗后，用10％的NaHCO3懸浮，調(diào)整細(xì)菌數(shù)為1×109 cfu/mL，每只灌胃0.2 mL，隔日一次，共3次。模型對(duì)照組和正常對(duì)照組給予同體積的0.9％氯化鈉溶液灌胃，隔日一次，共3次。Typl

3、-HGF治療組、Ty治療組、模型對(duì)照組和正常對(duì)照組灌胃3次后第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21d各處死兩只大鼠取胃、腸、肝、脾、腎組織勻漿后用ELISA方法檢測(cè)HGF在各組織中的表達(dá)、勻漿液質(zhì)粒提取后PCR方法檢測(cè)真核表達(dá)載體在組織中的分布、并通過(guò)各組對(duì)比觀察大鼠胃組織大體和鏡下表現(xiàn)的不同來(lái)說(shuō)明HGF的治療效果；Typl-GFP治療組灌胃3次后第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21d各處死兩只大鼠

4、取胃、腸、肝、脾、腎組織制備成冰凍切片熒光顯微鏡下觀察目的基因組織分布。 結(jié)果： 1.因?yàn)镠GF在生理情況下各組織即有，故Typl-HGF組試驗(yàn)數(shù)據(jù)是以正常對(duì)照組同時(shí)間處死大鼠的各組織勻漿為對(duì)照檢測(cè)，即生理值為0的情況下的值，也就是外源基因HGF在體內(nèi)的表達(dá)。Typl-HGF組大鼠處死后取胃、肝、脾、腎、大腸、小腸，勻漿后ELISA方法檢測(cè)結(jié)果表明在各組織中均檢測(cè)到有HGF表達(dá)，但胃、腸組織中表達(dá)較高。 2.Ty

5、pl-HGF組胃、肝、脾、腎、大腸、小腸組織勻漿后提取組織DNA后經(jīng)PCR檢測(cè)結(jié)果表明各組織均可檢測(cè)到真核表達(dá)載體的啟動(dòng)子CMV片段。 3.Typl-GFP組大鼠處死后取胃、肝、脾、腎、大腸、小腸組織制成冰凍切片在熒光顯微鏡下觀察：結(jié)果表明在肝、胃、腸觀察到較強(qiáng)的熒光，在脾、腎組織也觀察到微弱的熒光，熒光強(qiáng)度在5d到7d達(dá)到峰值，以后逐漸減弱。 4.通過(guò)對(duì)比可見Typl-HGF實(shí)驗(yàn)組大鼠胃組織潰瘍病變縮小，肉芽組織形成，