乳黃制劑對肝硬化模型大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的影響.pdf

1、目的：腸源性內(nèi)毒素血癥(IETM)在各種肝病，特別是肝硬化和重癥肝炎時發(fā)生率高。肝硬化患者由于腸道菌群失調(diào)，屏障功能受損，細菌易位增多，門體分流，同時肝臟細胞功能、Kupffer細胞功能減退，對內(nèi)毒素(LPS)降解能力下降，使腸道產(chǎn)生的內(nèi)毒素大量進入外周循環(huán)．IETM導致肝損傷機制很復雜，可直接損害肝細胞，還可以通過激活Kupffer細胞、單核巨噬細胞釋放促炎介質(zhì)間接損害肝細胞，又可誘發(fā)全身代謝和血流動力學紊亂，引起全身器官功能衰竭，出

2、現(xiàn)腹水、肝性腦病、肝腎綜合征等種種并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展，嚴重影響患者的預后。中醫(yī)理論中沒有對腸源性內(nèi)毒素血癥的專門論述，但根據(jù)其致病特點，屬于“內(nèi)生毒邪”范疇。導師張赤志教授根據(jù)中醫(yī)理論和臨床經(jīng)驗，認為本病病因病機為是由于肝脾腎功能失調(diào)，水濕內(nèi)停，瘀血阻滯，濕瘀互結，郁久化熱成毒。毒邪再犯肝體，肝失疏泄，脾失健運，腸道傳導失司，腑濁內(nèi)生，病位在肝、腸．據(jù)此立“通下解毒法”，結合“肝與大腸相通，肝病宜疏通大腸”的學術思想，選用酒制大黃和乳酸

3、菌素組成乳黃制劑防治肝硬化IETM．我們在前期防治急性肝性腦病的實驗研究中發(fā)現(xiàn)乳黃制劑(湖北省衛(wèi)生廳資助課題)能降低血漿內(nèi)毒素水平，較實驗性大鼠空白對照組，模型組，乳果糖對照組作用明顯。為了進一步研究該制劑在防治肝硬化IETM的作用機理，將從細胞分子水平進行探討。 方法：SPF級雄性Wister大鼠88只，體重200-230克，隨機分為6組：正常組、模型組、預防組、預防對照組、模型治療組、模型治療對照組。除正常組外，其余各組均采

4、用CcL4復合因素法制造肝硬化模型，飼養(yǎng)10周。正常組、模型組蒸餾水2ml/d灌胃；預防組、預防對照組在造模同時分別給予乳黃制劑、乳果糖2ml/d灌胃；造模第9周開始模型治療組、模型治療對照組分別給予乳黃制劑、乳果糖2ml/d灌胃連續(xù)2周。第10周末處死大鼠取材。 (1)在無熱源條件下采右心室血5 ml檢測血內(nèi)毒素水平； (2)半定量逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈法(RT-PCR)檢測大鼠肝組織LBPmRNA、CD14mRNA、TLR

5、-4mRNA的表達； (3)檢測血清D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)水平了解對腸通透性的影響； (4)取小腸組織的提取液200μl，應用自動放免儀測定各組樣品的腸黏膜分泌型免疫球蛋白A(S-IgA)濃度，了解對腸道免疫屏障功能的影響； (5)取肝右葉、脾組織各0.1g用生理鹽水洗凈后進行細菌培養(yǎng)，觀察腸道細菌移位的情況。 (6)取肝左葉作病檢。 結果： (1)乳黃制劑可明顯降低肝硬化大鼠內(nèi)毒

6、素水平(P<0.05)； (2)乳黃制劑可下調(diào)肝硬化大鼠肝組織LBPmRNA、CDl4mRNA、TLR4mRNA的表達水平，從而減少內(nèi)毒素對肝臟的直接或間接的傷害，尤其是模型治療組療效更佳； (3)乳黃制劑可明顯降低肝硬化大鼠血清D-乳酸、DAO水平(P<0.05)，降低腸通透性，尤以預防組效果明顯； (4)乳黃制劑能有效提高腸黏膜s-IgA的分泌水平(P<0.05)，早期干預效果佳； (5)預防組經(jīng)過乳

7、黃制劑干預后沒有出現(xiàn)腸道細菌移位情況； (6)乳黃制劑能改善預防組和模型治療組肝組織的肝硬化以及纖維組織增生、炎性細胞浸潤程度，其中預防組肝組織的病理變化改善明顯． 結論：乳黃制劑防治肝硬化大鼠內(nèi)毒素血癥的作用，可能有下列機制實現(xiàn)： ①清除腸道內(nèi)毒素，同時通過抑制LPS與脂多糖結合蛋白(LBP)以及相應受體CD14、TLR-4結合，降低腸道內(nèi)毒素的吸收； ②提高腸道局部免疫功能，有效阻止有害菌對腸黏膜的黏