IL-21調控異常與系統(tǒng)性紅斑狼瘡.pdf

1、背景和目的：
　　 活化B細胞進入生發(fā)中心(germinal center,GC)的明區(qū)接受抗原特異性濾泡輔助T細胞(follicular T helper cell Tfh)和濾泡樹突細胞(follicular dendritic cell,fDC)的篩選,是自身反應性B細胞清除的重要機制之一。而在生發(fā)中心,B細胞從暗區(qū)遷移到明區(qū)需要下調CXCR4。IL21是生發(fā)中心Tfh分泌的重要的B細胞活化調節(jié)因子,IL-21參與小鼠脾B

2、細胞CXCR4的表達調控,且對沒有接受特異性BCR信號及T細胞輔助的B細胞,IL-21抑制其增殖和/或啟動凋亡,可能是清除自身反應性B細胞的重要機制。為了明確IL-21是否參與人B細胞上CXCR4和CXCR5的表達調控以及系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)患者B細胞CXCR4及CXCR5表達異常是否與IL21相關,導致從GC的暗區(qū)遷移進入明區(qū)以及自身反應性B細胞清除異常,我們對IL21,C

3、D40L以及anti-IgM不同刺激條件SLE外周血B細胞表面CXCR4/5的變化進行分析,并與健康對照(HC)進行比較。為了研究SLE的B細胞是否存在Akt過度活化、以及IL21調控Akt信號通路異常,而導致IL21對CXCR4調控障礙,及對分化、存活調控作用異常,我們分析了IL21對SLE外周血B細胞pAkt、pStat3的作用、及對B細胞分化、存活的影響,并與HC比較,并應用PI3K阻斷劑LY294002阻斷病人B細胞異常活化的A

4、kt,觀察在SLE中IL21對B細胞的異常調控是否通過Akt過度磷酸化進行。為了進一步研究IL21對SLE的B細胞凋亡異常調控的可能機制,我們在刺激后對兩種受Akt通路調控的抗凋亡蛋白mcl1、flip的表達進行了檢測。
　　 方法：
　　 SLE和HC外周血B細胞在control、IL21、anti—IgM+CD40L、anti-IgM+CD40L+IL21四個條件下培養(yǎng),3天后用流式細胞術測定CXCR4、CXCR5表

5、達；20分鐘后測定胞內pAkt、pStat3；6天后測定不同B細胞亞群的比例變化；2天后檢測凋亡率的差別。SLE的B細胞用LY294002阻斷后再刺激6天,檢測B細胞亞群的比例變化。
　　 結果：
　　 1.anti-IgM+CD40L或IL21刺激明顯下調HC的B細胞表面CXCR4(p<0.0001及p=0.0096),但在SLE患者中不能明顯下調(p=0.2575及p=0.2361)
　　 2.IL21單用或

6、聯(lián)合anti-IgM+CD40L均可使HC及SLE外周血B細胞表面CXCR5及pStat3明顯上調(CXCR5:IL21單用,HC p=0.0263,SLE p=0.0605anti-IgM+CD40L+IL21,HC p=0.0264,SLE p=0.0214。pStat3:IL21單用,HC p=0.0153,SLE p=0.0634；anti—IgM+CD40L+IL21,HC p=0.0142,SLEp=0.0375)。LY29

7、4002阻斷后IL21仍可上調CXCR5；而AG490阻斷后IL21不能上調CXCR5。
　　 3.單獨IL21刺激20min可上調SLE外周血B細胞pAkt,對HC無明顯作用；anti-IgM+CD40L刺激可明顯上調HC外周血B細胞pAkt,加IL21可明顯抑制pAkt。而SLE pAkt上調幅度小,加IL21對pAkt無抑制作用。
　　 4.anti-IgM+CD40L刺激3天后,HC與SLE外周血B細胞mcl1、

8、flip表達顯著增高,SLE顯著高于HC(mcl1:,增加倍數(shù)HC1.97±1.91,SLE4.71±2.63,p=0.0060)。anti-IgM+CD40L聯(lián)合IL21,刺激3d胞內mcl-1平均熒光強度,HC增加(p=0.0242)。SLE無統(tǒng)計學差異。
　　 5.IL21刺激外周血B細胞6天,IgD+CD38hi細胞群、CD27+CD38hi漿細胞、CD38+CD138+PC在HC中比例無明顯變化或減少,但在SLE中比例

9、增加。SLE外周血B細胞預先予LY294002處理,則IL21不能上調上述三群細胞比例。
　　 6.IL21刺激2d,促進HC B細胞凋亡,抑制SLE B細胞凋亡。
　　 結論：
　　 SLE的B細胞Akt過度活化,IL21對Akt通路調控異常,可能造成IL21或活化刺激不能有效下調SLE患者B細胞表面的CXCR-4；單獨IL21刺激可促進SLE的外周血B細胞向漿細胞分化,抑制凋亡。用LY294002抑制SLE