益智仁中神經(jīng)保護(hù)成分的分離與活性研究.pdf

1、益智仁為姜科多年生草本植物益智(AlpiniaoxyphyllaMiq)的干燥成熟果實(shí)，是中國(guó)傳統(tǒng)中藥之一。有溫脾止瀉，攝唾涎，固精縮尿的功效，用于脾寒瀉泄，腹中冷痛，口多唾涎，腎虛遺尿，小便頻數(shù)，遺精白濁。 本研究主要結(jié)合細(xì)胞生物學(xué)活性分析，利用溶劑極性大小的不同，對(duì)益智仁的乙醇提取物進(jìn)行初步分離，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相等不同的萃取組分。利用DPPH(1，1-

2、diphenyl-2-picrylhydrazyl)法檢測(cè)了五種萃取組分在體外的直接抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)萃取組分乙酸乙酯相、氯仿相、水相、正丁醇相的自由基清除能力與其濃度呈十分明顯的正相關(guān)，其中乙酸乙酯相清除自由基的能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于其他各組分。進(jìn)一步分離乙酸乙酯相，首次從該植物中分離得到單體化合物原兒茶酸。選用神經(jīng)細(xì)胞的模式細(xì)胞株P(guān)C12(ratpheochromocytomacellline)細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，利用過(guò)氧化氫對(duì)細(xì)胞進(jìn)行損傷，造成

3、直接的氧化損傷模型。利用MTT(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenylterazoliumbromide)法分別檢測(cè)了五種萃取組分及原兒茶酸對(duì)損傷的PC12細(xì)胞的保護(hù)效應(yīng)；采用LDH(lactatedehydrogenase)法，檢測(cè)了五種萃取組分及原兒茶酸對(duì)細(xì)胞膜的影響。結(jié)果表明，乙酸乙酯相和原兒茶酸對(duì)損傷細(xì)胞具有明顯的保護(hù)活性，穩(wěn)定了膜結(jié)構(gòu)，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。 文中用大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

4、，連續(xù)7天腹腔注射5mg/kg劑量原兒茶酸，應(yīng)用Y型迷宮，觀察原兒茶酸對(duì)大鼠認(rèn)知能力的影響；應(yīng)用生物化學(xué)方法，借助于紫外分光光度儀，觀察原兒茶酸對(duì)大鼠腦組織內(nèi)抗氧化酶SOD(superoxidedismutase)、GSH-PX(glutathioneperoxidase)和脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA(malondialdehyde)的影響。結(jié)果顯示，原兒茶酸能改善老年大鼠的認(rèn)知能力，顯著提高老年大鼠腦組織內(nèi)GSH-PX活力，降低MDA含量。表

5、明，原兒茶酸具有神經(jīng)保護(hù)功能，保護(hù)機(jī)制可能是提高腦組織內(nèi)源性抗氧化酶活力，減少體內(nèi)自由基的產(chǎn)生。連續(xù)7天腹腔注射5mg/kg和10mg/kg劑量原兒茶酸，觀察原兒茶酸對(duì)大鼠脾重指數(shù)的影響；應(yīng)用生物化學(xué)方法，觀察原兒茶酸對(duì)大鼠肝臟、脾臟組織內(nèi)抗氧化酶SOD、GSH-PX和CAT(catalase)及脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA的影響。結(jié)果顯示原兒茶酸可劑量依賴性地提高老年大鼠脾重指數(shù)，提高肝臟、脾臟組織內(nèi)GSH-PX和CAT活力，降低MDA含量。表