轉(zhuǎn)SoDREB2煙草抗旱性及甘蔗轉(zhuǎn)SoDREB2研究.pdf

1、甘蔗是食糖生產(chǎn)的主要原材料，由于近年來(lái)的天氣變化極端，甘蔗生長(zhǎng)發(fā)育受到極大的危害，干旱的危害尤為嚴(yán)重，造成大量減產(chǎn)，因而選育出高抗旱性新品種迫在眉睫。傳統(tǒng)的育種手段由于周期長(zhǎng)，進(jìn)度較為緩慢，已經(jīng)不能滿足現(xiàn)代農(nóng)業(yè)育種的要求，而利用基因工程手段使外源基因?qū)敫收嶂校嘤龈呖剐缘男缕贩N，逐步建立起一套完整快捷的體系，有效提高了甘蔗新品種選育效率。本實(shí)驗(yàn)以甘蔗中克隆得到的SoDREB2基因，鑒定了該基因的功能以及在煙草中的遺傳穩(wěn)定性，同時(shí)進(jìn)行

2、了甘蔗的遺傳轉(zhuǎn)化研究，本實(shí)驗(yàn)以主要結(jié)果如下:
　　1.對(duì)轉(zhuǎn)SoDREB2基因煙草的T1代進(jìn)行鑒定，檢測(cè)結(jié)果顯示:T1代正義轉(zhuǎn)基因煙草檢出率為73.33％，反義轉(zhuǎn)基因煙草檢出率為65.56％，說(shuō)明轉(zhuǎn)基因煙草經(jīng)過(guò)T1代遺傳，有近1/3出現(xiàn)性狀分離或丟失，其中正義轉(zhuǎn)基因煙草比反義轉(zhuǎn)基因煙草穩(wěn)定。同時(shí)經(jīng)檢測(cè)結(jié)果表明SoDREB2基因在煙草中表達(dá)上調(diào)，并符合孟德爾遺傳定律。
　　2.對(duì)苗期進(jìn)行土壤干旱脅迫處理，測(cè)定生理生化指標(biāo)。包括細(xì)

3、胞膜透性、葉綠素含量、脯氨酸含量(Pro)、丙二醛含量(MDA)，以及酶活性測(cè)定，包括超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化物酶(POD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)，煙草抗旱性表現(xiàn)為正義轉(zhuǎn)基因煙草＞對(duì)照野生型煙草＞反義轉(zhuǎn)基因煙草。進(jìn)一步驗(yàn)證甘蔗SoDREB2基因?qū)μ岣咧仓昕购敌云鸬秸蛘{(diào)節(jié)作用。
　　3.對(duì)誘導(dǎo)甘蔗胚性愈傷組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)采用甘蔗生長(zhǎng)最旺盛時(shí)期—生長(zhǎng)期的心葉為外植體，用75％酒精進(jìn)行表面消毒后，分別采用MS和N6

4、兩種不同培養(yǎng)基誘導(dǎo)愈傷組織，MS愈傷組織誘導(dǎo)率為55％，N6培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率為62％。
　　4.以由新臺(tái)糖22號(hào)新葉為原材料誘導(dǎo)出的Ⅱ型胚性愈傷為受體材料，EH105為轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌菌株，載體為PBI121，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法，將從甘蔗中克隆得到的SoDREB2基因利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)至甘蔗品種新臺(tái)糖22中，經(jīng)過(guò)抗生素G418篩選后，對(duì)目的基因和標(biāo)記基因分別進(jìn)行PCR檢測(cè)，有2株ROC22初步確認(rèn)導(dǎo)入正義SoDREB2基因，轉(zhuǎn)化率為