子宮內(nèi)膜癌組織中PI3K-p110β、Akt及Bad的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：⑴檢測PI3K-P110β、Akt及Bad在增殖期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜非典型增生及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)情況，探討上述三個指標(biāo)在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用。⑵通過RNAi探討PI3K-P110β對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞凋亡的影響。 方法：①免疫組化SP法分析PI3K-P110β、Akt及Bad在增殖期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜非典型增生及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)情況。②Western blot分析PI3K-P110β、

2、Akt及Bad在增殖期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜非典型增生及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)情況。③構(gòu)建PI3K-P110β siRNA的表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)染Ishikawa細(xì)胞。④逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)分析轉(zhuǎn)染前后Ishikawa細(xì)胞中PI3K-P110β的表達(dá)情況。⑤利用流式細(xì)胞技術(shù)(Hoechst33342/PI雙染檢測法)分析轉(zhuǎn)染前后Ishikawa細(xì)胞的凋亡變化。 結(jié)果：⑴通過免疫組化SP法研究PI3K-P110β及Akt在

3、增殖期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜非典型增生及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示二者均主要在胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)，與增殖期子宮內(nèi)膜組織相比較，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)量明顯增高(P<0.05)。采用Western blot分析PI3K-P110β及Akt的表達(dá)量，結(jié)果與免疫組化圖像分析的結(jié)果一致，在不同類型的子宮內(nèi)膜組織中PI3K-P110β及Akt蛋白的表達(dá)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。⑵通過免疫組化SP法研究Bad在增殖期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜非

4、典型增生及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示Bad主要在胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)，與增殖期子宮內(nèi)膜組織相比較，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)降低(P<0.05)。采用Western blot分析Bad的表達(dá)量，結(jié)果與免疫組化圖像分析的結(jié)果一致，在不同類型的子宮內(nèi)膜組織中Bad蛋白的表達(dá)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。⑶構(gòu)建三對siRNA重組質(zhì)粒pGCsilencerTMU6/Neo/GFP/PI3K-P110β siRNA，應(yīng)用真核轉(zhuǎn)染技術(shù)成功的將

5、上述三對重組質(zhì)粒及陰性對照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa。⑷通過RT-PCR方法檢測pGCsi-PI3K-P110β1、pGCsi-PI3K-P110β2、pGCsi-PI3K-P110β3對Ishikawa細(xì)胞中PI3K-P110β mRNA的表達(dá)抑制率，分別為88.90％、70.19％和96.43％。干擾組與對照組分別比較，抑制率明顯增高。⑸通過流式細(xì)胞技術(shù)(Hoechst33342/PI雙染法)檢測轉(zhuǎn)染pGCsi-PI3

6、K-P110β1、pGCsi-PI3K-P110β2、pGCsi-PI3K-P110β3的Ishikawa細(xì)胞凋亡率，分別為18，3％、12.2％和14.1％，同轉(zhuǎn)染了pGCsi—neg組、脂質(zhì)體對照組和空白對照組相比，凋亡明顯增高。 結(jié)論：①PI3K-P110β在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中高表達(dá)，提示PI3K-P110β在子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮著重要作用。但在不同手術(shù)病理分期和不同組織病理學(xué)分級的子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中PI