煙酸通過(guò)誘導(dǎo)血紅素加氧酶1表達(dá)抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討煙酸能否通過(guò)誘導(dǎo)血紅素加氧酶1表達(dá)抑制氧化應(yīng)激導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，以及煙酸誘導(dǎo)血紅素加氧酶1表達(dá)的信號(hào)途徑。進(jìn)一步闡明煙酸抗動(dòng)脈粥樣硬化的藥理機(jī)制，為煙酸的臨床應(yīng)用提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：過(guò)氧化氫(100uM)用于誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，實(shí)驗(yàn)分別使用不同濃度煙酸(0.25，0.5或1.0mM)預(yù)處理人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞不同時(shí)間(2、4、6、12或24h)，然后加入H2O2；在抑制實(shí)驗(yàn)中，HUVECs分別使用p38-MAPKs途徑

2、抑制劑SB203580(10uM)、ERKs途徑抑制劑PD98059(25uM)、JNKs途徑抑制劑SP600125(10uM)或HO-1抑制劑ZnPPIX(10uM)預(yù)處理，然后在加入煙酸或H2O2。熒光實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)HO-1 mRNA的表達(dá)，Western Blot檢測(cè)HO-1蛋白的變化，同時(shí)測(cè)量HO-1活性，TUNEL法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：①在煙酸(1mM)處理2、4、6、12或24h后再加入H

3、2O2(100uM)孵育12h，H2O2+Niacin組HO-1 mRNA和蛋白表達(dá)較H2O2組均有顯著升高(P<0.05)，HO-1表達(dá)隨煙酸作用時(shí)間延長(zhǎng)總體呈升高趨勢(shì)；當(dāng)HUVECs分別用0.25、0.5或1.0mM的煙酸預(yù)處理24h后，H202+Niacin組的HO-1 mRNA和蛋白表達(dá)與H2O2組或?qū)φ战M相比顯著升高(P<0.05)，且HO-1表達(dá)隨煙酸濃度濃度增加總體呈升高趨勢(shì)；
　?、谠跓熕?1mM)處理2、4、6、

4、12或24h后再加入H2O2(100uM)孵育12h，H2O2+Niacin組HO-1活性較H2O2組均有顯著升高(P<0.01)，且HO-1活性隨時(shí)間延長(zhǎng)總體呈升高趨勢(shì)。以對(duì)照組或H2O2組作為對(duì)照，當(dāng)HUVECs分別用0.25、0.5或1.0mM的煙酸預(yù)處理24h后，H2O2+Niacin組的HO-1活性與H2O2組或?qū)φ战M相比顯著升高(P<0.01)，且HO-1活性隨濃度增加總體呈升高趨勢(shì)；
　?、墼谘趸瘧?yīng)激(H2O2)條件

5、下，SB203580(p38-MAPKs抑制劑，10uM)處理能顯著抑制煙酸誘導(dǎo)的HUVECs HO-1表達(dá)(P<0.01)，而PD98059(ERKs抑制劑，25uM)及SP600125(JNKs抑制劑，10uM)無(wú)此效應(yīng)；
　　④ H2O2組較空白對(duì)照組內(nèi)皮細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；H2O2+Niacin組與H2O2組比較內(nèi)皮細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著減少(P<0.01)；HO-1抑制劑ZnPPⅨ(10uM