手術應激后兒童外周血淋巴細胞、中性粒細胞凋亡和線粒體功能變化及臨床意義.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、通過對經(jīng)歷手術和麻醉應激的患兒外周血淋巴細胞和中性粒細胞線粒體功能的檢測,探討線粒體介導的細胞凋亡在手術應激中的意義.一、手術應激后兒童外周血淋巴細胞凋亡及線粒體功能變化目的:探討手術應激后兒童外周血淋巴細胞的凋亡及線粒體功能變化.方法:選擇擇期手術患兒16例,分別于術前24小時、術后24小時、術后72小時采集外周靜脈血3.5--5ml.用梯度離心法分離出淋巴細胞,置于RPMI-1640培養(yǎng)基中,培養(yǎng)15小時.加入藻紅蛋白標記的抗CD4

2、<'4+>、CD<'8+>作標記,分等量兩份分別加入20ug/ml的7-AAD、40nmol/L的DioC6(3)在4℃避光20分鐘染色.再加入20ug/ml放線菌素D,1﹪的多聚甲醛,4℃下保存20分鐘固定.然后通過流式細胞儀檢測細胞凋亡和線粒體膜電位的變化.二、手術應激后兒童外周血中性粒細胞凋亡及線粒體功能變化目的:探討手術應激后兒童外周血中性粒細胞的凋亡及線粒體功能變化.方法:選擇擇期手術患兒16例,分別于術前24小時,術后24小

3、時,術后72小時采集外周血3.5--5ml加入肝素.用梯度離心法分離出中性粒細胞,置于RPMI-1641培養(yǎng)基中,培養(yǎng)15小時.分等量兩份分別加入20ug/ml的7-AAD、40nmol/L的DioC6(3)在4℃避光20分鐘染色.再加入20ug/ml放線菌素D,1﹪的多聚甲醛,4℃保存20分鐘固定.通過流式細胞儀檢測細胞凋亡和線粒體膜電位的變化.三、結論:1)手術應激使兒童外周血CD<'4+>、CD<'8+>淋巴細胞凋亡增加,同時熒光

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