謝海洲方治療老年性癡呆早期模型大鼠的分子機制研究.pdf

1、目的：以去卵巢加D-半乳糖注射的大鼠作為老年性癡呆早期的動物模型，觀察謝海洲方對模型大鼠海馬神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF、NGF及其受體TrkB、TrkA、p75基因表達的影響以及對海馬總膽固醇含量及其代謝相關(guān)基因（HMG-COAR、CYP46、ApoE）表達的影響，以便進一步理解謝海洲方作用的分子機制。
　　 方法：①選用4月齡雌性SD大鼠48只，常規(guī)飼養(yǎng)2周后隨機分為2組：假手術(shù)組（Sham組）和去卵巢組（OVX組），其中Sham組

2、8只，OVX組40只。OVX組行雙側(cè)卵巢切除術(shù)。Sham組行同樣手術(shù)程序，但僅切除少量小網(wǎng)膜脂肪組織。術(shù)后2周，Sham組腹腔注射生理鹽水（1.67ml/Kg.d）；OVX組腹腔注射D-半乳糖（66.7 mg/Kg.d）。注射D-半乳糖6周后，將OVX組隨機分為5組：病理對照組（PC組）、謝海洲方組（HC組）、脈絡(luò)寧組（MN組）、阿托伐他汀組（AT組）和VC+VE組（DV組），每組8只。各組均灌胃4周，劑量分別如下：Sham組（蒸餾水5

3、 ml/Kg.d），PC組（蒸餾水5 ml/Kg.d），HC組（謝海洲方水提液5 mg/Kg.d），MN組（脈絡(luò)寧注射液1.8 ml/Kg.d），AT組（阿托伐他汀鈣7.2mg/Kg.d），DV組（VC45 mg/Kg.d VE27 mg/Kg.d）。灌胃過程中，除Sham組繼續(xù)注射生理鹽水外，其余5組繼續(xù)注射D-半乳糖。灌胃4周后（即去卵巢術(shù)12周后）處死大鼠；②去卵巢手術(shù)6周后，用Morris水迷宮對所有大鼠進行學(xué)習(xí)記憶訓(xùn)練，每天4

4、次，每次間隔5分鐘，共四天。去卵巢手術(shù)8周后和動物處死前一天，在同樣條件下進行Morris水迷宮實驗1天，方法同上，以后三次逃避潛伏期（escape latency）的平均值作為評價大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的指標(biāo)；③行為訓(xùn)練完成后立即麻醉大鼠，開顱并迅速分離雙側(cè)海馬置于液氮中，用于海馬總RNA的提取及總膽固醇的提取和測定。分離大鼠子宮并進行稱重。用Trizol法提取大鼠單側(cè)海馬總RNA，RT-PCR法測定大鼠海馬BDNF、NGF、TrkA、

5、TrkB、p75、HMG-COAR、CYP46、ApoE mRNA的相對表達量。用β-actin的mRNA表達量作為內(nèi)參照。用總膽固醇測定試劑盒測定海馬總膽固醇的含量。
　　 結(jié)果：⑴與Sham組相比，OVX組大鼠子宮重量明顯降低（P<0.01）。PC組、HC組、MN組、AT組和DV組大鼠的子宮重量無差別；⑵與Sham組相比，去卵巢手術(shù)8周后OVX組大鼠的逃避潛伏期延長（P<0.05），表明去卵巢加D-半乳糖注射后模型大鼠的空間

6、學(xué)習(xí)記憶力降低。而給予謝海洲方和脈絡(luò)寧注射液4周后，HC組和MN組大鼠的逃避潛伏期均明顯短于PC組；⑶與Sham組相比，PC組大鼠海馬BDNF mRNA的相對表達量明顯降低，而與PC組相比，HC組大鼠海馬BDNF mRNA的相對表達量顯著增加；⑷與Sham組相比，PC組大鼠海馬TrkB mRNA的相對表達量明顯降低，而與PC組相比，HC組和DV組大鼠海馬TrkB mRNA的相對表達量均顯著提高；⑸與Sham組相比，PC組大鼠海馬NGF

7、mRNA的相對表達量明顯降低，而與PC組相比，HC組和MN組大鼠海馬NGF mRNA的相對表達量均顯著提高；⑹與Sham組相比，PC組大鼠海馬TrkA mRNA相對表達量降低，與PC組相比，HC組大鼠海馬TrkA mRNA的相對表達量無統(tǒng)計學(xué)意義；⑺與Sham組相比，PC組大鼠海馬p75 mRNA的相對表達量明顯降低，與PC組相比，HC組大鼠海馬p75mRNA的相對表達量升高；⑻與Sham組相比，PC組大鼠海馬CYP46 mRNA的相對

8、表達量明顯降低，而與PC組相比，HC組、AT組、MN組大鼠海馬CYP46 mRNA的相對表達量均增加；⑼與Sham組相比，PC組大鼠海馬HMG-CoAR mRNA的相對表達量明顯升高，而與PC組相比，HC組、MN組、AT組、DV組大鼠海馬HMG-CoAR mRNA的相對表達量均降低；⑽與Sham組相比，PC組大鼠海馬ApoE mRNA的相對表達量明顯升高，而與PC組相比，HC組、MN組、AT組、DV組大鼠海馬ApoE mRNA的相對表達