實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血腦血管痙攣后缺血性腦損害的發(fā)病機(jī)理及粉防己堿的干預(yù)作用研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血腦血管痙攣后缺血性腦損害的發(fā)病機(jī)理及粉防己堿的干預(yù)作用研究姓名：錢濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：張慶俊20060401中文摘要池假穿刺假注血，其余2組受試動(dòng)物采用經(jīng)枕大池穿刺二次注入自體動(dòng)脈血的方法制作遲發(fā)性腦血管痙攣模型。自第一次注血始(day0)，粉防己堿組動(dòng)物給予40m創(chuàng)瞻(40mg／m1)腹腔注射給藥，每日一次；生理鹽水組動(dòng)物給予等量生理鹽水。按注血后不同時(shí)間點(diǎn)(dayl、

2、day3、day5、day7、dayl0和dayl4)經(jīng)心灌注4％多聚甲醛的磷酸緩沖液(01mol／L，pH72)300ml后分批(每次各5只)處死，取出整腦在上述固定液內(nèi)浸泡12h，常規(guī)石蠟包埋。取視交叉至乳頭體之間的腦組織行冠狀切片，厚度5啪，強(qiáng)染色，部分切片行O25％硫堇染色，供光鏡觀察；供透射電鏡觀察的標(biāo)本取己固定的家兔視交叉和乳頭體之間腦組織在2％預(yù)冷的戊二醛溶液中切取1mm厚左右的海馬橫斷薄片，30min后再于2％戊二醛溶液

3、中切成1mm3小組織塊，繼續(xù)固定2h，2％鋨酸后固定lh，脫水后醋酸鈾復(fù)染，苯二甲酸二丙烯脂包埋，半薄切片定位海馬錐體細(xì)胞層后進(jìn)行修塊，超薄切片，枸掾酸鉛染色后上鏡觀察。硫堇染色cAl組織學(xué)改變分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：O級(jí)：無神經(jīng)元死亡；1級(jí)：散在的神經(jīng)元死亡；2級(jí)：成片的神經(jīng)元死亡；3級(jí)：幾乎全部的神經(jīng)元死亡，取雙側(cè)平均等級(jí)作為統(tǒng)計(jì)值。高倍鏡下計(jì)數(shù)海馬cAl區(qū)每1mm區(qū)段內(nèi)細(xì)胞膜完整、胞核飽滿、核仁清晰的錐體細(xì)胞數(shù)目，每張切片雙側(cè)海馬各計(jì)數(shù)7個(gè)區(qū)段

4、，取平均數(shù)為神經(jīng)元密度(neuronaldensity，ND)。結(jié)果：既染色光鏡觀察提示假手術(shù)組動(dòng)物海馬CAl區(qū)錐體細(xì)胞核大而圓，核仁明顯，細(xì)胞排列較致密整齊，錐體細(xì)胞可見多層，胞漿內(nèi)尼氏體豐富。CVS模型組動(dòng)物海馬CAl區(qū)錐體細(xì)胞稀疏，層次不清楚；有部分細(xì)胞缺失；有的細(xì)胞旁有空染區(qū)，出現(xiàn)核固縮、胞質(zhì)濃染、胞體變??；出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。粉防己堿組：兔海馬組織CAl區(qū)錐體細(xì)胞細(xì)胞排列尚整齊，層次較清楚；較少見核固縮現(xiàn)象；未發(fā)現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。

5、硫堇染色：假手術(shù)組動(dòng)物海馬cAl區(qū)無明顯損傷，組織學(xué)分級(jí)為O一1級(jí)，ND(神經(jīng)元密度)為22l士12(cells／mm，下同)。CvS模型組兔海馬CAl區(qū)有明顯組織損傷，其中SAH后3d海馬CAl區(qū)錐體細(xì)胞缺失較多，組織學(xué)分級(jí)均為23級(jí)，ND為42士11，SAH后7d組織學(xué)分級(jí)為2—3級(jí)，ND為25士lo，與假手術(shù)組動(dòng)物海馬CAl區(qū)ND相比有明顯減少(p001)。粉防己堿組：兔海馬組織CAl區(qū)錐體細(xì)胞細(xì)胞排列尚整齊，層次尚清楚，胞漿內(nèi)尼