兩種蛙的棘頭蟲和線蟲感染調(diào)查及種類鑒定.pdf

1、在人們更多關(guān)注哺乳動(dòng)物和鳥類保護(hù)的同時(shí)，卻忽略了一個(gè)龐大而古老的家族——兩棲動(dòng)物，特別是其中的蛙類。我國蛙類資源豐富，根據(jù)中國蛙類目錄統(tǒng)計(jì)，我國共有蛙340余種。由于蛙類能適應(yīng)陸地和水域的不同生存條件，加以生活環(huán)境的多變，使其感染寄生蟲可能性的幅度亦相應(yīng)擴(kuò)大。這不僅會(huì)對(duì)蛙類自身造成影響，而且會(huì)對(duì)人類健康產(chǎn)生威脅。本研究旨在對(duì)實(shí)驗(yàn)室2013～2014年檢獲的蛙類棘頭蟲和線蟲進(jìn)行感染情況調(diào)查和種類鑒定，以便了解蛙類寄生棘頭蟲和線蟲的概況，為

2、相關(guān)研究及防控工作的開展奠定基礎(chǔ)。
　　1.蛙的種類鑒定
　　為了確定用于寄生蟲感染所剖檢蛙的種類，利用線粒體12S序列對(duì)98只青蛙和84只蟾蜍的種類進(jìn)行了鑒定。首先分批次提取青蛙和蟾蜍的肝臟、腸道或血液DNA，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序。將測(cè)序所得結(jié)果進(jìn)行BLAST對(duì)比后，利用最大似然法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果顯示，90只青蛙為黑斑蛙（Rananigromaculata），8只為虎紋蛙（Hop lobatrachus rugulo

3、 sus），84只蟾蜍為中華大蟾蜍（Buf gargarizans），這與傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果一致。
　　2.兩種蛙的棘頭蟲和線蟲感染情況的初步調(diào)查
　　對(duì)2013～2014年兩年收集的90只黑斑蛙和84只中華大蟾蜍，經(jīng)過編號(hào)后并進(jìn)行剖檢，按臟器檢查、收集寄生蟲體，記錄并統(tǒng)計(jì)棘頭蟲與線蟲寄生部位、感染率和感染強(qiáng)度。結(jié)果顯示:在90只黑斑蛙體內(nèi)共收集棘頭蟲和線蟲550條，其中棘頭蟲314條，線蟲236條?？傮w感染率為65.56

4、％，棘頭蟲為41.11％，線蟲為50％;平均感染強(qiáng)度為9.32條。而在黑斑蛙體內(nèi)不同的臟器感染中，腸道感染率最高，為77.97％，其次為胃和肺。在84只中華大蟾蜍體內(nèi)共收集棘頭蟲和線蟲1422條，其中棘頭蟲207條，線蟲1215條。總體感染率為86.90％，棘頭蟲為28.57％，線蟲為84.52％;平均感染強(qiáng)度為19.48條。而在中華大蟾蜍體內(nèi)不同的臟器感染中，肺臟的感染率最高，為73.97％，其次為腸和生殖系統(tǒng)。通過對(duì)檢出蟲體形態(tài)的初

5、步觀察，發(fā)現(xiàn)棘頭蟲有1科2屬，線蟲有5種。但具體是哪一種類需要進(jìn)一步的研究。本調(diào)查結(jié)果為初步掌握上海市黑斑蛙與中華大蟾蜍寄生棘頭蟲與線蟲蟲感染狀況和做好寄生蟲病的防治提供了基礎(chǔ)依據(jù)。
　　3.兩種蛙的棘頭蟲的種類鑒定
　　本研究對(duì)黑斑蛙和中華大蟾蜍體內(nèi)檢獲的521條棘頭蟲，按每只蛙體每個(gè)臟器至少制作一張封片的原則，結(jié)果共制作65個(gè)封片。然后進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，仔細(xì)測(cè)量棘頭蟲吻鉤數(shù)目及排列方式、是否有體棘、睪丸的位置及排列方式、粘

6、液腺數(shù)目和排列方式以及蟲卵形狀等特征，并與文獻(xiàn)對(duì)比。結(jié)果鑒定出2屬7種棘頭蟲，分別是蟾蜍偽棘頭蟲（Pseudoacanthocehpalus bufonis）、黎氏阮偽棘頭蟲（Pseudoacant hocephalus nguye nt hileae）、里斯偽棘頭蟲（Pseudoacant hocephalusreesei）、盧茲偽棘頭蟲（Pseudoacanthocephalus lutzi）、斯梅爾偽棘頭蟲（Pseudoacant

7、hocephalus smalesi）、光潔棘頭蟲（Acant hocephalus luc idus）和蛙棘頭蟲（Acant hocephalus ranae）。
　　4.兩種蛙的線蟲的種類的初步鑒定
　　利用分子生物學(xué)方法對(duì)從90只黑斑蛙和84只中華大蟾蜍體內(nèi)收集到的1451條線蟲進(jìn)行科屬的判定，即按臟器的不同，分別提取腸道、肺、體腔、胃、肺、生殖道共13條線蟲的DNA，利用線蟲cox1引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后BLAST

8、比對(duì)建立ML進(jìn)化樹。最后再通過形態(tài)學(xué)觀察確定線蟲的種類。結(jié)果顯示，在1451條線蟲中，共有2科2屬5種，分別為棒線屬線蟲（Rhabdias sp.）和對(duì)盲囊屬線蟲（Contracaecum sp.），但是具體的種類還需形態(tài)學(xué)的進(jìn)一步探索。
　　5.中國蛙類寄生棘頭蟲與線蟲的種類與地理分布
　　為了解我國蛙類棘頭蟲與線蟲的種類與地理分布，本文收集了報(bào)道我國蛙類棘頭蟲與線蟲的相關(guān)文獻(xiàn)，并依據(jù)較新的棘頭蟲與線蟲分類系統(tǒng)整理成文。共