2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景與目的: 近年來,肺癌的發(fā)病率呈逐年上升的態(tài)勢。非小細胞肺癌(non-small cell lungcancer,NSCLC)占肺癌所有病例的80%以上。由于常發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移,肺癌患者的5年生存率只有15%左右。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是決定肺癌患者預后的主要因素。隨著醫(yī)學分子生物學理論和技術(shù)的發(fā)展,針對肺癌轉(zhuǎn)移機制的靶向分子生物學研究取得了較大的進展,但引導肺癌細胞定向遷移的確切機制仍有待研究。CCR7是CC類趨化因子受體的成員之一,其配

2、體CCL21特異的高表達于淋巴結(jié)的高內(nèi)皮靜脈(high endothelialvenules,HEV)及淋巴管內(nèi)皮中。CCL21/CCR7在免疫和炎癥反應的淋巴細胞定向遷移中發(fā)揮關鍵作用。最近的研究發(fā)現(xiàn)CCL21/CCR7在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用令人矚目,研究證實CCL21/CCR7在黑色素瘤、乳腺癌、胃癌、食管癌、肝細胞癌、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌、子宮頸癌和慢性淋巴細胞白血病的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。已有研究者在NSCLC組織中檢測到CCR7

3、 mRNA的表達,但其是否參與了肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的過程還不得而知。為此本研究擬應用免疫組化檢測肺癌組織中CCR7及血管內(nèi)皮生長因子-C(Vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)蛋白的表達,并分析其與NSCLC臨床病理參數(shù)的關系,然后構(gòu)建表達CCR7的質(zhì)粒載體,并穩(wěn)定轉(zhuǎn)染.A549細胞,進而檢測CCL21/CCR7軸對A549細胞增殖、鈣內(nèi)流、遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移相關因子表達及體內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響

4、。探討CCL21/CCR-7在肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用與機制,為探索肺癌新的治療方法提供理論和實驗依據(jù)。 方法: 1.收集65例NSCLC患者手術(shù)切除組織存檔蠟塊。免疫組化法分別檢測肺癌組織中CCR7和VEGF-C蛋白的表達,分析其與肺癌臨床病理參數(shù)的關系,并進一步探討CCR7聯(lián)合VEGF-C檢測在診斷NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的價值。 2.設計和構(gòu)建能表達CCR7 cDNA的質(zhì)粒載體(pEGFP-CCR7),并以不表

5、達任何基因的pEGFP-N1質(zhì)粒為陰性對照,分別通過脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染至A549細胞,經(jīng)G418篩選(800 μg/mL)并穩(wěn)定傳代后,采用WST-1、軟瓊脂集落形成實驗、激光掃描共聚焦顯微鏡(laser scanningconfocal microscope,LSCM)和Boyden小室模型,檢測CCL21對A549-CCR7細胞和A549-pEGFP細胞體外增殖、鈣內(nèi)流、遷移和侵襲的影響;然后應用Real-Time RT-PCR和Wes

6、tern blot檢測CCL21對A549-CCR7細胞和A549-pEGFP細胞轉(zhuǎn)移相關因子表達的影響。 3.將A549-CCR7細胞和A549-pEGFP細胞等比例混合,并種植裸鼠爪墊皮下,一周后Real-Time RT-PCR檢測各級淋巴結(jié)中CCR7相對于原位腫瘤組織的表達量,比較A549-CCR7細胞和A549-pEGFP細胞較早淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力。采用裸鼠爪墊皮下種植淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型,比較A549-CCR7細胞和A549-p

7、EGFP細胞經(jīng)淋巴道晚期發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的能力,以及對荷瘤裸鼠生存期的影響。 結(jié)果:1.CCR7和VEGF-C蛋白在NSCLC組織中均有較高表達,分別達56.9%和 60%。CCR7和VEGF.C蛋白在NSCLC中的表達呈正相關(P<0.01),而且兩者的表達水平均隨肺癌組織TNM分期升高及伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生而逐漸增強(P<0.01)。聯(lián)合檢測CCR7和VEGF-C在診斷NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的準確度是比較高的,ROC曲線下面積

8、達0.782。 2.培養(yǎng)基中無CCL21存在的情況下A549-CCR7細胞和A549-pEGFP細胞體外增殖、鈣內(nèi)流、遷移和侵襲能力均無顯著差異(P>0.05);在CCL21作用下,與A549-pEGFP細胞相比A549-CCR7細胞的體外增殖、鈣內(nèi)流、遷移和侵襲能力均顯著增強(P<0.01)。這提示CCL21/CCR7軸能夠增強A549細胞的體外增殖、鈣內(nèi)流、遷移和侵襲能力。在不表達CCR7的情況下,有無CCL21對A549細

9、胞VEGF-C、MMPs和TIMPs的表達均無明顯影響(P>0.05);而在表達CCR7的情況下,CCL21能夠顯著增強A549細胞VEGF-C、MMP-2、9、11的表達(P<0.01或0.05),顯著降低TIMP-1,2的表達(P<0.01或0.05),但對MMP-1的表達無明顯影響(P>0.05)。 3.胭窩、髂動脈旁以及腎門淋巴結(jié)中A549-CCR7細胞的比例均顯著高于原位腫瘤組織(P<0.01),而且隨著淋巴結(jié)的級數(shù)增

10、高,A549-CCR7細胞所占比例有增高的趨勢。與A549-pEGFP細胞相比,A549-CCR7細胞的荷瘤裸鼠生存期顯著縮短(P<0.01),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率顯著提高(P<0.01)。提示CCL21/CCR7軸能夠顯著增強A549細胞經(jīng)淋巴道發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的能力。 結(jié)論: 1.CCR7可作為診斷NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的新型標志物,其與VEGF-C聯(lián)合檢測有助于NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的早期診斷和確定手術(shù)時的切除范圍。 2

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