鼻咽癌時辰放療與拓撲替康時辰放射增敏的機制研究.pdf

1、目的：本實驗通過研究鼻咽癌組織乏氧狀況的晝夜節(jié)律，來探討鼻咽癌時辰放療的效應(yīng)是否與癌組織的乏氧程度有關(guān)，從而為鼻咽癌時辰放療提供理論依據(jù)。另外，我們的前期實驗研究表明，拓撲替康可以增加鼻咽癌的放射敏感性，其機制與拓撲替康抑制腫瘤細胞拓撲異構(gòu)酶I表達有關(guān)。而且不同時辰進行放射增敏，療效有顯著性差異，本實驗通過研究其作用靶點(DNA拓撲異構(gòu)酶I)的晝夜表達節(jié)律，來探討拓撲替康對鼻咽癌放射增敏時辰效應(yīng)機制。 方法：40只Balb/C雌

2、性裸小鼠在統(tǒng)一光照條件下(光照時間7：00～19：00，黑暗時間19：00～7：00)飼養(yǎng)，同步化至少3周以上。建立統(tǒng)一的生物節(jié)律以后，在裸鼠雙側(cè)腋下接種低分化鼻咽癌細胞(CNE-Ⅱ)，建立鼻咽癌移植瘤的腫瘤模型。成瘤并達到入組標準后，按隨機數(shù)目表法分為四組，在10am，4pm，10pm，4am(即3、9、15、21HALO，hours after light onset)四個時辰點分批取出瘤塊，福爾馬林固定、石蠟包埋，制成組織切片。采

3、用免疫組織化學(xué)的方法分別檢測四個時辰腫瘤組織的乏氧程度和拓撲異構(gòu)酶I的表達水平，并進行免疫組化圖像定量分析。然后采用完全隨機單因素方差分析法(ANOVA法)分析四個時辰點腫瘤組織的乏氧狀況和拓撲異構(gòu)酶I的表達水平差異的顯著性；并采用q檢驗(Student-Newrman-Keuls法，SNK法)進行組間兩兩比較，檢驗兩兩組間差異的顯著性。 結(jié)果：鼻咽癌組織在3，9，15，21 HALO的乏氧程度隨時間變化有顯著性差異(P<0.0

4、5)，峰值位于3～9HALO，低值位于15～21HALO。但3HALO和9HALO兩個時辰點之間腫瘤乏氧程度的差異無顯著性，15HALO和21HALO兩個時辰點之間差異無顯著性。從數(shù)據(jù)來看，乏氧程度最高的時辰點9HALO的PI值(positive index，陽性指數(shù)，免疫組化定量指標)為29.36±6.75，而乏氧程度最低的時辰點21HALO的PI值為18.55±3.96，9HALO的腫瘤乏氧程度較21HALO高了將近1.6倍。鼻咽癌

5、組織中DNA拓撲異構(gòu)酶I的表達水平也隨時間變化有顯著性差異(P<0.05)，峰值位于15HALO，其余的三個時辰點之間DNA拓撲異構(gòu)酶I的表達水平無顯著性差異。從數(shù)據(jù)來看，DNA拓撲異構(gòu)酶I表達水平最高的時辰點15HALO的PI值為26.79±6.81，而DNA拓撲異構(gòu)酶I表達水平最低的時辰點21HALO的PI值為19.06±3.63，15HALO的DNA拓撲異構(gòu)酶I表達水平較21HALO高了約1.4倍。 結(jié)論：人鼻咽癌裸鼠移植

6、瘤的乏氧狀況隨晝夜交替呈節(jié)律性變化。其中腫瘤乏氧程度在3～9HALO最強，15～21HALO最弱。鼻咽癌時辰放療療效的差異與腫瘤組織不同時辰的乏氧程度高度相關(guān)。這初步為鼻咽癌的時辰放療提供了實驗依據(jù)。人鼻咽癌裸鼠移植瘤的DNA拓撲異構(gòu)酶I表達水平也隨晝夜交替呈節(jié)律性變化。其中拓撲異構(gòu)酶I表達水平峰值位于15HALO，其余三個時辰點的之間無顯著性差異。這為在拓撲異構(gòu)酶I表達的峰值15HALO實行放射增敏療效最佳提供了實驗室依據(jù)。因此我們認