化學(xué)表現(xiàn)遺傳修飾劑對牛蒡內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物的激活研究.pdf

1、內(nèi)生真菌可產(chǎn)生豐富的次級代謝產(chǎn)物，是抗生素、免疫抑制劑以及降血脂等類藥物的重要資源庫。藥用植物中存在大量的內(nèi)生真菌，這些內(nèi)生真菌可直接參與到藥用植物體內(nèi)有效成分的合成。而由于內(nèi)生真菌基因組中沉默基因簇的存在，絕大多數(shù)的次級代謝產(chǎn)物在實驗條件下不能完全表達(dá)。化學(xué)表觀遺傳修飾劑（Chemical epigenetic manipulation）可特異或半特異的抑制化學(xué)表觀遺傳修飾酶的活性，能對內(nèi)生真菌的生物合成進行調(diào)控。激活一部分未表達(dá)次級

2、代謝產(chǎn)物的沉默基因簇，將大大的推進內(nèi)生真菌次級代謝產(chǎn)物的研究。本文主要利用化學(xué)表觀遺傳修飾劑（5-氮雜胞苷）對牛蒡內(nèi)生真菌進行激活研究，并對激活后的次級代謝產(chǎn)物進行殺蟲活性篩選。
　　本文主要開展了以下兩方面的工作:
　　一、牛蒡次級代謝產(chǎn)物及八株牛蒡內(nèi)生真菌次級代謝產(chǎn)物殺蟲活性的篩選
　　首先利用石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇對牛蒡的次級代謝產(chǎn)物進行提取，并篩選了三相提取物的殺蟲活性，發(fā)現(xiàn)石油醚相的殺蟲活性最好，繼而對石

3、油醚相提取物的化學(xué)成分進行GC/MS分析，發(fā)現(xiàn)其主要成分為酯、醛、酸、烯等四類化合物，其含量所占比例分別為:37.83％、7.86％、2.86％、1.74％，占了牛蒡石油醚提取物總量的50.29％。然后對牛蒡中的內(nèi)生真菌進行分離純化，得到二十三株內(nèi)生真菌，分別命名為:NY-1、NY-2、NY-3、NY-4、NY-5、NY-6、NY-7、NY-8、NY-9、NY-10、NY-11、NJ-1、NJ-2、NG-1、NG-2、NG-3、NG-4

4、、NG-5、NG-6、NG-7、NG-8、NG-9以及NG-10。對其中八株內(nèi)生真菌的菌絲體及發(fā)酵液的提取物進行了殺蟲活性的篩選，并以三種生成中常見化學(xué)農(nóng)藥為對照。發(fā)現(xiàn)NY-5發(fā)酵液提取物的殺蟲活性最好。最后對NJ-1菌絲體及發(fā)酵液的提取物進行殺蟲活性跟蹤，得出NJ-1具有殺蟲活性的化合物主要存在于其發(fā)酵液中，尤其是經(jīng)過石油醚-乙酸乙酯(5∶1)洗脫體系洗脫的產(chǎn)物。
　　二、化學(xué)表觀遺傳修飾劑（5-氮雜胞苷）對八株牛蒡內(nèi)生真菌次生

5、代謝產(chǎn)物的激活研究
　　首先利用不同濃度的5-氮雜胞苷對從牛蒡中的八株內(nèi)生真菌進行激活，對激活后的真菌菌絲體及發(fā)酵液的提取物進行了殺蟲活性篩選，發(fā)現(xiàn)被10μM的5-氮雜胞苷激活的NY-1的發(fā)酵液提取物的殺蟲活性最好，其LD50是對照組中活性最好的敵敵畏的LD50值的16.5倍。然后對菌株對菌株NY-1以及NJ-1利用18srDNA及ITS序列檢測技術(shù)進行了鑒定，分別鑒定NY-1為黑曲霉（Asperillium niger）和NJ-