rhG-CSF通過LFA-1-ICAM-1信號途徑影響Th1-Th2分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)通過干預(yù)淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1(lymphocyte functional antigen-1，LFA-1)/細(xì)胞間黏附分子．1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)協(xié)同刺激信號途徑對異基因外周血造血干細(xì)胞移植(allo-PBSCT)供者CD4+T細(xì)胞活化，增殖以及向Th1/Th2方向分化的影響，探討allo-PBSCT過程中T細(xì)胞免疫耐

2、受發(fā)生的機(jī)制，為提高allo-PBSCT成功率、降低allo-PBSCT后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的發(fā)生率和嚴(yán)重程度提供新的方法。 方法：(1)采用miniMACS磁珠分選系統(tǒng)分離純化健康人以及allo-PBSCT供者rhG-CSF動員前后外周血CD4+T淋巴細(xì)胞；(2)建立0KT3(CD3單克隆抗體，0KT3)、ICAM-1通過LFA-1/ICAM-1協(xié)同刺激信號途徑體外激活CD4+T淋巴細(xì)胞的體系和方法；(3)流式細(xì)

3、胞術(shù)檢測allo-PBSCT供者動員前后外周血CD4+T淋巴細(xì)胞表面CD25、CD54、CD69等系列活化標(biāo)志的變化，觀察LFA-1/ICAM-1協(xié)同刺激信號途徑介導(dǎo)的CD4+T淋巴細(xì)胞活化能力的變化；(4)MTT法檢測allo-PBSCT供者動員前后外周血CD4+T淋巴細(xì)胞通過LFA-1/ICAM-1協(xié)同刺激信號途徑介導(dǎo)的增殖能力的變化；(5)通過RT-PCR和實(shí)時(shí)定量PCR檢測allo-PBSCT供者動員前后外周血CD4+T淋巴細(xì)胞

4、IFN-γ、IL-4 mRNA的表達(dá)變化，觀察rhG-CSF動員后供者CD4+T細(xì)胞的分化方向變化。 結(jié)果：通過miniMACS磁珠分選系統(tǒng)獲得allo-PBSCT供者rhG-CSF動員前后高純度外周血CD4+T淋巴細(xì)胞。體外用0KT3+ ICAM-1通過LFA-1/ICAM-1協(xié)同刺激信號途徑激活CD4+T淋巴細(xì)胞，(1)rhG-CSF動員后CD4+T細(xì)胞表面CD25、CD54、CD69等系列活化標(biāo)志表達(dá)較rhG-CSF動員前

5、明顯下降；(2)rhG-CSF動員后CD4+T淋巴細(xì)胞通過LFA-1/ICAM-1協(xié)同刺激信號途徑介導(dǎo)的增殖能力較rhG-CSF動員前下降；(3)在未用0KT3+ICAM-1刺激時(shí)，動員前后CD4+T淋巴細(xì)胞不表達(dá)或弱表達(dá)IL-4 mRNA；動員前后CD4+T淋巴細(xì)胞均表達(dá)IFN-γ mRNA。(4)rhG-CSF動員后CD4+T淋巴細(xì)胞IFN-γmRNA的表達(dá)較rhG-CSF動員前下降；rhG-CSF動員后IL-4 mRNA的表達(dá)較動