FKHRL-1調(diào)控血管損傷后平滑肌細胞增殖的研究.pdf

1、研究背景：
　　 經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（PCI）是目前治療冠心病的有效手段之一，但是再狹窄（RS）仍是制約這一技術(shù)應(yīng)用的主要問題。血管壁的機械性損傷所致的增殖效應(yīng)是造成PCI 再狹窄的主要原因，多種生長因子、細胞因子、粘附分子等參與其病理生理過程。轉(zhuǎn)錄因子FKHRL-1（Forkhead Transcription Factor in rhabdomyosarcoma-like 1,FoxO3a）作為Forkhead 轉(zhuǎn)錄因子家

2、族的重要成員，主要通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控信號傳導(dǎo)途徑在細胞的生長發(fā)育、細胞分化、代謝、凋亡和免疫等方面起著重要作用?；蛑委熓悄壳邦A(yù)防血管再狹窄較為有效的方法之一，而選擇合適的基因和載體是基因治療再狹窄的關(guān)鍵之一。本實驗旨在通過將目的基因FoxO3a 轉(zhuǎn)染損傷后的血管平滑肌細胞（VSMC），觀察其對損傷后血管平滑肌細胞增殖能力的影響。
　　 目的：
　　 （1）構(gòu)建大鼠急性頸總動脈球囊損傷模型；
　　 （2）完成脂質(zhì)體Li

3、pofectmaine2000 介導(dǎo)的質(zhì)粒HA-Foxo3a TM轉(zhuǎn)染大鼠球囊損傷后血管平滑肌細胞；
　　 （3）觀察轉(zhuǎn)染前后血管平滑肌細胞增殖能力的變化情況。
　　 方法：
　　 體外培養(yǎng)急性球囊損傷后SD 大鼠頸總動脈血管平滑肌細胞，并用脂質(zhì)體Lipofectmaine2000 介導(dǎo)質(zhì)粒HA-Foxo3a TM 轉(zhuǎn)染，應(yīng)用免疫組化法鑒定細胞表型、MTT 法檢測細胞增殖、RT-PCR 和Westernblot

4、方法檢測基因和蛋白的表達。
　　 結(jié)果：
　　 （1）成功建立大鼠急性頸總動脈球囊損傷模型并培養(yǎng)出不同損傷時間點的血管平滑肌細胞；且損傷后血管平滑肌細胞增殖能顯著升高（P＜0.01）；
　　 （2）頸動脈急性損傷后血管平滑肌細胞的磷酸化FoxO3a 蛋白表達明顯升高（P＜0.01），且細胞的增殖能力較正常血管平滑肌細胞顯著增高（P＜0.01）；
　　 （3）脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒HA-Foxo3a TM 基因轉(zhuǎn)染

5、至損傷后血管平滑肌細胞后，細胞增殖能力顯著降低（P＜0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 成功建立SD 大鼠急性頸總動脈球囊損傷模型，損傷后可見血管平滑肌細胞增殖能力顯著增強。球囊損傷后的血管平滑肌細胞內(nèi)發(fā)生FoxO3a 顯著磷酸化，且該磷酸化過程發(fā)生迅速、持續(xù)時間短，磷酸化的高峰期出現(xiàn)在球囊損傷后12 小時以內(nèi)。球囊損傷后，血管平滑肌細胞增殖能力的變化與FoxO3a 的磷酸化可能存在著相關(guān)性，提示FoxO3a 的磷酸化可能