MCM2檢測細(xì)胞增殖性在結(jié)直腸腫瘤診斷中的應(yīng)用研究.pdf

1、[目的]1探索大腸癌、大腸腺瘤及正常大腸粘膜組織中MCM2的分布表達(dá)情況。2利用Realtime-PCR技術(shù)精確定量MCM2-mRNA在大腸癌及大腸腺瘤組織、正常大腸粘膜組織中的表達(dá)差異，為進(jìn)一步細(xì)致分析結(jié)直腸細(xì)胞不同突變階段MCM2的表達(dá)，打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 [方法]150例大腸癌組織、大腸腺瘤及正常組織分別選取自四川大學(xué)華西醫(yī)院胃腸外科2004年9月-2004年12月手術(shù)患者及門診纖維腸鏡患者，其中癌12例、腺瘤33例、正常組織

2、5例，術(shù)后均經(jīng)病理證實(shí)，組織標(biāo)本實(shí)時(shí)保存于-150℃冰箱內(nèi)。2免疫組織化學(xué)(ImmunohistochemistyIHC)：根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)，采用羊抗人MCM2抗體，通過免疫組織化學(xué)方法，從蛋白水平定位檢測大腸腺癌、大腸腺瘤及正常大腸粘膜組織中MCM2抗原的存在及表達(dá)部位。3熒光定量PCR(RealtimequantitativePCR)：定量檢測大腸腺瘤、大腸腺癌及正常大腸粘膜中MCM2-mRNA的表達(dá)，Trizol試劑分別

3、從大腸腺癌、大腸腺瘤及大腸粘膜正常組織中提取總RNA，用MCM2的特異引物;上游引物：5’-CACATCGAGTCCATGATCC-3’下游引物：5’-CAAAAGTCTTGCGCATGCT-3’進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，從mRNA水平定量檢測MCM2在大腸腺瘤及大腸腺癌、正常大腸粘膜組織中的表達(dá)差異。 [結(jié)果]1免疫組織化學(xué)方法可見在正常大腸粘膜組織中MCM2棕黃色信號顆粒表達(dá)在腺泡凹底部的1/3至1/2部分，在腺泡的頂部則無

4、表達(dá)，而在大腸腺瘤及大腸癌組織則呈全層腺泡上皮的表達(dá)，大腸腺瘤及大腸癌組織中MCM2表達(dá)部位并無差異性。2通過Realtime-PCR方法(45個(gè)循環(huán))從大腸癌及大腸腺瘤組織中檢測到160bp目的基因片段，但兩者表達(dá)的量有差異，大腸腺癌組表達(dá)均數(shù)為(X=31.5833)而大腸腺瘤組均數(shù)為(X=16.6061)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析MCM2在兩者表達(dá)量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004P＜0.05)。 [結(jié)論]1增殖特異性抗原MCM2在正常