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文檔簡介
1、子宮內(nèi)膜異位癥人體組織學模型構建及內(nèi)異癥和非內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜粘附特點分析 研究背景 子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis,簡稱內(nèi)異癥)是育齡婦女的多發(fā)病。它所引起的痛經(jīng)、下腹痛和不孕嚴重影響婦女的健康和生活質(zhì)量。目前發(fā)病機制不清,治療對策有限。 在內(nèi)異癥諸多的發(fā)病學說中,Sampson的經(jīng)血逆流學說是主導理論,但其難以解釋經(jīng)血逆流現(xiàn)象中僅小部分形成內(nèi)異癥以及盆腹腔以外內(nèi)異癥的問題。新近的研究提示,造成這一
2、現(xiàn)象的原因是內(nèi)異癥的在位內(nèi)膜與正常人相比,具有諸如超微結構、基因、表達產(chǎn)物和機能狀態(tài)的差異。 模型建立是研究內(nèi)異癥的重要手段。盡管已成功構建了多種內(nèi)異癥模型,但仍然存在一些不足,如細胞模型與人體生理狀況有較大差別,不能反映人體各種細胞問相互影響的錯綜復雜的關系;動物模型的模擬程度一直為一些學者所批評,認為內(nèi)異癥是人類和非人類靈長類動物(包括獼猴和狒狒等)所特有的一種疾病,而大多數(shù)動物模型所選擇的嚙齒類動物和兔等無周期性月經(jīng),不發(fā)
3、生子宮內(nèi)膜異位癥,用其構建內(nèi)異癥模型并不合理。而最理想的動物模型包括獼猴和狒狒等因其來源稀缺、價格昂貴,可行性受到了很大限制。 子宮內(nèi)膜異位癥人體組織學模型是近lO年來出現(xiàn)的一種新型模型。其建模方法是用人子宮內(nèi)膜組織體外分離成組織碎片后接種于腹膜組織間皮面共培養(yǎng)以探索子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機制。它的優(yōu)點在于:①模擬程度高:它直接反映了人體子宮內(nèi)膜與人體腹膜的相互作用,模擬內(nèi)異癥的早期發(fā)病過程;②可動態(tài)觀察內(nèi)異癥患者在發(fā)病早期在位內(nèi)
4、膜與腹膜組織粘附、侵襲并形成新生血管的連續(xù)過程,得到直接組織學證據(jù);③可比較分析內(nèi)異癥和非內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜和腹膜的異同,為進一步探索病因提供途徑;④資源豐富,可行性好。但是,迄今為止,關于此模型的研究均為定性研究,且各家培養(yǎng)條件不一,結果差異也較大;尚未有研究涉及到定量分析。 研究目的 1、 探索子宮內(nèi)膜組織培養(yǎng)條件及子宮內(nèi)膜組織與腹膜組織粘附的培養(yǎng)條件。 2、分析子宮內(nèi)膜與腹膜粘附的細胞學行為及分子生物學表現(xiàn)
5、。 3、對比研究內(nèi)異癥和非內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜與腹膜的粘附特點。 研究方法 l、比觀察氣液面培養(yǎng)和培養(yǎng)基中培養(yǎng)對于子宮內(nèi)膜組織及子宮內(nèi)膜組織粘附腹膜的影響。 2、子宮內(nèi)膜接種腹膜后在培養(yǎng)的不同時間點收集標本用光鏡觀察子宮內(nèi)膜與腹 膜粘附發(fā)生的時間,粘附部位的細胞學行為。 3、免疫組化和免疫熒光方法鑒別粘附部位各種細胞及ELISA檢測培養(yǎng)基中sICAM-1、MMP-2和VEGF的分泌。 4、電
6、鏡觀察內(nèi)異癥和非內(nèi)異癥患者的子宮內(nèi)膜組織和腹膜組織的異同。 5、振蕩試驗、光鏡和電鏡觀察內(nèi)異癥和非內(nèi)異癥患者的子宮內(nèi)膜與腹膜自身及 交叉接種后各組間粘附的異同。 6、進行內(nèi)異癥和非內(nèi)異癥患者的子宮內(nèi)膜組織培養(yǎng),ELISA檢測培養(yǎng)基中sICAM-1的分泌規(guī)律。 結果 1、子宮內(nèi)膜組織氣液平面培養(yǎng)較培養(yǎng)基中培養(yǎng)組織結構維持好,離體培養(yǎng)時間長。 2、子宮內(nèi)膜組織和腹膜組織在氣液平面培養(yǎng)能較早發(fā)生粘附和侵
7、襲。 3、子宮內(nèi)膜組織可以通過腺體和基質(zhì)細胞與腹膜間皮面粘附,粘附處大部分腹 膜間皮層缺損,小部分能見到完整的間皮細胞層;離體培養(yǎng)時間延長,間皮層逐漸缺失。 4、子宮內(nèi)膜組織接種腹膜組織離體培養(yǎng)3d后能觀察到子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞明顯侵 襲腹膜間皮層;內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜發(fā)生侵襲可能要早于非內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜。 5、子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜組織接種腹膜組織的培養(yǎng)基中sICAM-1,MMP-2和VEGF均呈活性分泌;腹膜組
8、織表達sICAM-1,基本不表達MMP-2和VEGF。 6、內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜組織和非內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜組織存在超微結構差異, 前者表現(xiàn)更活躍的功能結構。 7、內(nèi)異癥和非內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜組織與腹膜組織離體培養(yǎng)后粘附情況差別不大。 8、內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜組織離體培養(yǎng)后分泌sICAM-1較非內(nèi)異癥患者明顯增快。 結論 1、本課題探索了子宮內(nèi)膜組織的培養(yǎng)技術,表明子宮內(nèi)膜組織置于氣液界面培 養(yǎng),組織存
9、活狀態(tài)較好;子宮內(nèi)膜組織與腹膜組織共培養(yǎng)于氣液平面,用濾膜維持腹膜的平整牽張狀態(tài),可以提高子宮內(nèi)膜組織與腹膜的粘附成功率。 2、子宮內(nèi)膜接種于腹膜離體培養(yǎng)后粘附發(fā)生時間很早,1小時即可形成牢固粘附。子宮內(nèi)膜可以通過腺體和基質(zhì)細胞介導與腹膜粘附,可以和間皮層完整或不完整的腹膜粘附,并發(fā)生侵襲;隨培養(yǎng)時間延長,粘附處腹膜間皮層逐漸缺失。 3、子宮內(nèi)膜接種于腹膜離體培養(yǎng)3天后能見到明顯的侵襲發(fā)生,主要為基質(zhì)細胞介導;內(nèi)異癥患者
10、子宮內(nèi)膜發(fā)生侵襲可能要早于非內(nèi)異癥患者。 4、內(nèi)異癥子宮內(nèi)膜組織與非內(nèi)異癥內(nèi)膜組織的超微結構有一定差異,前者有功 能活躍的特點,再一次提示在位內(nèi)膜在內(nèi)異癥發(fā)病中的重要作用。 5、粘附是子宮內(nèi)膜組織與腹膜組織相互作用的第一步,或“早期事件”,在內(nèi)異 癥和非內(nèi)異癥患者間差異不顯著,但這種粘附的清除以及后面的侵襲,可能在內(nèi)異癥和非內(nèi)異癥患者有所不同。 6、腹膜間皮層的缺損可能是由于內(nèi)異癥患者盆腹腔存在更多的細胞因子
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