血紅素氧合酶-一氧化碳系統(tǒng)在妊娠期高血壓疾病患者發(fā)病機(jī)制中作用的研究.pdf

1、第一部分 血紅素氧合酶和內(nèi)源性一氧化碳在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的作用 目的：通過(guò)妊娠期高血壓疾病孕婦胎盤組織中血紅素氧合酶的表達(dá)和內(nèi)源性CO含量測(cè)定，探討血紅素氧合酶/一氧化碳系統(tǒng)在妊娠期高血壓疾病發(fā)病中的作用機(jī)制。 方法：逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)40例妊娠期高血壓疾病患者組(HDCP組)和15例正常晚孕婦女(對(duì)照組)胎盤組織中HO-1、HO-2mRNA的表達(dá)；HE染色觀察胎盤絨毛及血管病

2、變；免疫組化染色法檢測(cè)胎盤組織中HO-1、HO-2的定位和表達(dá)，采用高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)對(duì)其定量分析；分光光度法測(cè)定胎盤組織中HO的活性；Westernblot檢測(cè)胎盤組織中HO-1、HO-2蛋白質(zhì)的表達(dá)；雙波長(zhǎng)定量測(cè)定法檢測(cè)胎盤組織勻漿上清液碳氧血紅蛋白(COHb)含量；硝酸還原酶法測(cè)定胎盤組織中NO代謝產(chǎn)物亞硝酸基/亞硝基(No2-/NO3-)。 結(jié)論：妊娠期高血壓疾病患者胎盤HO-1蛋白表達(dá)、轉(zhuǎn)錄和活性下降，內(nèi)源性

3、CO生成減少，推測(cè)HO/CO系統(tǒng)可能參與了妊娠期高血壓疾病發(fā)病過(guò)程。HO/CO與NO/NOS系統(tǒng)二者在胎盤功能中可能有協(xié)同和互補(bǔ)作用。 第二部分 HO/CO系統(tǒng)在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中作用的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察氯血紅素(Hm)、二氯化鈷(CoCl2)誘發(fā)化學(xué)缺氧和低氧培養(yǎng)模擬妊娠期高血壓疾病體內(nèi)內(nèi)皮細(xì)胞缺氧環(huán)境對(duì)培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞血紅素氧合酶表達(dá)和增殖，以及對(duì)細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度[Ca2+]i的影響。 方

4、法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，用氯血紅素和原卟啉鋅，以誘導(dǎo)和阻斷HO-1的表達(dá)。通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)HO-1、HO-2mRNA和蛋白的定位及表達(dá)；酶聯(lián)免疫法檢測(cè)培養(yǎng)上清液中碳氧血紅蛋白(COHb)含量；MTT比色法和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖；RT-PCR觀測(cè)CoCl2與血紅素氧合酶表達(dá)間的量-效和時(shí)-效關(guān)系；熒光分光光度法觀察常氧、低氧條件下，鈣熒光探針(Fura-2/AM)負(fù)載培養(yǎng)的

5、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞[Ca2+]i的變化。 結(jié)論：Hm、CoCl2、缺氧培養(yǎng)誘導(dǎo)慢性缺氧促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖并上調(diào)血紅素氧合酶-1和內(nèi)源性CO，是保護(hù)內(nèi)皮損傷的分子學(xué)基礎(chǔ)。缺氧細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子水平升高，可能與內(nèi)源性CO共同參與血管張力的調(diào)節(jié)。HO/CO系統(tǒng)可能在妊娠期高血壓疾病等心血管病的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。 第三部分 HO/CO系統(tǒng)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化應(yīng)激損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究 目的：采用過(guò)氧化

6、氫制作人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞體外氧化應(yīng)激損傷的細(xì)胞模型，通過(guò)缺氧預(yù)處理和氯血紅素預(yù)處理，觀察HO/CO系統(tǒng)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的影響。 方法：觀察各組細(xì)胞在光鏡、電鏡下形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的改變；用臺(tái)盼藍(lán)排斥實(shí)驗(yàn)、MTT法檢測(cè)了各組細(xì)胞活力；LDH釋放量評(píng)價(jià)細(xì)胞損傷程度；并通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)觀察其與血紅素氧合酶表達(dá)間的關(guān)系。 結(jié)論：體外采用500umol/L過(guò)氧化氫為血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的最適宜濃度。缺氧

7、、10umol/L氯血紅素預(yù)處理對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷有明顯的保護(hù)作用。 第四部分 MAPK信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)在妊娠期高血壓疾病中的調(diào)控及其與HO/CO系統(tǒng)的相互關(guān)系初探 目的：ERK1/ERK2MAPKs信號(hào)途徑對(duì)缺氧和酸性成纖維細(xì)胞因子(aFGF)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)以及在妊娠期高血壓疾病HO/CO系統(tǒng)中的調(diào)控作用。 方法：aFGF或缺氧刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，采用RT-PCR檢測(cè)胎盤

8、組織和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HO-1mRNA表達(dá)水平；Westernblot測(cè)定胎盤組織和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ERK1/ERK1磷酸化水平；培養(yǎng)上清液和胎盤組織勻漿上清液中碳氧血紅蛋白(COHb)測(cè)定；MTT比色法觀察PD98059對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用。 結(jié)論：缺氧通過(guò)激活ERK1/ERK2信號(hào)傳導(dǎo)途徑，誘導(dǎo)HUVECHO/CO系統(tǒng)的表達(dá)。ERK信號(hào)途徑參與了aFGF介導(dǎo)的HUVEC增殖。表明ERK1/ERK2信號(hào)通路參與了妊娠期高血壓疾