佛甲草等景天屬植物藥中黃酮類物質的抗腫瘤活性研究及含量測定.pdf

1、佛甲草是一種常用草藥及我國多民族用藥,來源于景天科(Crassulaceae)景天屬植物佛甲草(SedumlineareThunb.)的全草,曾收載于1977年版《中國藥典》(一部),具清熱解毒、消腫、止血功能,用于治療咽喉腫痛、目赤、痢疾、漆瘡、帶狀皰疹、癰腫、丹毒、燙傷、火傷及外傷出血。其同屬植物垂盆草(S.sarmentosumBunge)的干燥全草為較常用中藥,多版中國藥典收載。我國土家族地區(qū)均將佛甲草與垂盆草用于多種癌癥治療,

2、幼嫩部分在產地還常作蔬菜食用。可見二者療效廣泛且藥用安全,具有較高研究開發(fā)價值。在課題組前期研究基礎上,筆者就佛甲草、垂盆草的總黃酮以及佛甲草中幾種黃酮類單體化合物的體外抗腫瘤活性、抗腫瘤機理(對DNA拓撲異構酶I活性的抑制作用)進行了初步的研究;還通過高效液相色譜法(HPLC)測定了不同采收期的佛甲草及垂盆草、凹葉景天(S.emarginatumMigo)中黃酮類活性成分槲皮素和山柰素的含量,為佛甲草等植物藥的質量控制提供了新的方法,

3、并初步確定了3種藥材的最適采收期。
　　課題組前期研究表明,黃酮類成分是佛甲草及其同屬植物藥垂盆草、凹葉景天抗腫瘤作用的主要活性成分,且總體上佛甲草的活性較好。為摸清佛甲草的具體抗腫瘤活性成分(群),對佛甲草、垂盆草總黃酮和從佛甲草中分離純化出的7種黃酮類單體化合物:黃芪苷、木犀草素、槲皮素、化合物2、化合物4、化合物8、化合物11,以及上述各單體化合物按其在佛甲草中的大致比例混合的混合物,進行了體外抗腫瘤活性研究?？疾炝怂鼈儗?

4、種腫瘤細胞即人肺癌細胞(A549)、人食管癌細胞(EC109)、人肝癌細胞(HepG2)、人口腔癌細胞(Accm)及一種正常細胞非洲綠猴腎細胞(vero)的增殖抑制作用。采用MTT法研究分析了各提取物對不同腫瘤細胞增殖的抑制程度。結果發(fā)現,佛甲草和垂盆草總黃酮及佛甲草中7種單體化合物(群)對體外培養(yǎng)的各腫瘤細胞及正常細胞均表現出不同程度的抑制作用,抑制率均隨著提取物濃度的增加而增高,在測定的濃度范圍內呈現一定的劑量依賴性。比較而言,化合

5、物2對人肝癌細胞(HepG2)的抑制活性較好,且對正常細胞(vero)毒性很低;槲皮素及化合物11均對人肺癌細胞(A549)有較高抑制率;化合物4對各腫瘤細胞均有相對較強的抑制作用(但都不是最強);佛甲草、垂盆草總黃酮對各腫瘤細胞的抑制作用均為最強?？梢姺鸺撞葜懈鼽S酮類化合物是通過復雜的協同作用來發(fā)揮抗腫瘤活性的,除了上述7種單體化合物外,應還有其他黃酮類化合物協同地參與此抗腫瘤作用。
　　為探討上述抗腫瘤活性成分的作用機理,又首

6、先初步篩選了佛甲草、垂盆草各活性物質對DNA拓撲異構酶I(DNATopoI)的抑制作用,發(fā)現槲皮素及化合物4的效果較好。再對兩者的作用方式及機理進行了研究,結果表明,槲皮素和化合物4對TopoI有抑制作用,且均為拓撲異構酶阻遏劑。槲皮素是通過先與TopoI結合,阻止了TopoI與底物DNA的正常結合,從而發(fā)揮TopoI抑制作用;而化合物4可能既與TopoI結合又與DNA結合來發(fā)揮抑制拓撲異構酶I的作用。為了從分子層面上進一步考察槲皮素及

7、化合物4抑制TopoI的作用機理,還進行了簡單的分子對接實驗。結果再次證明,槲皮素是通過先與TopoI結合從而發(fā)揮TopoI抑制作用的,并初步推測出了槲皮素與TopoI活性位點的結合方式。
　　采用高效液相色譜(HPLC)法測定了不同采收期的佛甲草的水解產物槲皮素及山柰素的含量,并對比測定了同屬植物藥垂盆草、凹葉景天不同采收期樣品中槲皮素及山柰素的含量。結果發(fā)現,不同采收期3種藥材樣品中的槲皮素、山柰素含量及含量比差異較大,結合課