法舒地爾對彌漫性腦損傷大鼠CaMKII-TAk-1通路的影響.pdf

1、目的：1、探索法舒地爾對彌漫性腦損傷大鼠CaMKII/TAk-1通路的影響。2、探索法舒地爾對彌漫性腦損傷大鼠腦保護(hù)作用。
　　方法：清潔級健康SD雄性大鼠144只。按照隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為正常對照組、模型組和法舒地爾低劑量組、法舒地爾高劑量組。采用Marmarou法制作急性彌漫性腦損傷大鼠模型，造模成功后于24h行行為學(xué)評分，觀察大鼠行為學(xué)改變；再分別于1h、3h、6h、12h、24h、48h處死行HE染色觀察腦組織形態(tài)學(xué)變化

2、，行免疫組織化學(xué)和Western Blot觀察皮層腦組織CaMKII和TAk-1表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果：1、行為學(xué)評分結(jié)果：對照組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分全部為24分，模型組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分大都在7～9分之間，法舒地爾組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分大都在11～13分之間。與對照組比較，模型組大鼠行為學(xué)評分降低。與模型組比較，法舒地爾組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分升高，高劑量組較低劑量組明顯。2、形態(tài)學(xué)結(jié)果：傷后大體觀察，模型制作成功后，幾乎所有大鼠均可

3、見外傷性蛛網(wǎng)膜下腔出血，腦實質(zhì)可見點片狀出血。腦表面血管充血明顯，未見腦組織明顯損壞。HE染色光鏡觀察結(jié)果，對照組腦皮質(zhì)組織結(jié)構(gòu)大致正常，細(xì)胞大小形態(tài)正常，細(xì)胞排列規(guī)則，細(xì)胞核藍(lán)染，形態(tài)表現(xiàn)規(guī)則，細(xì)胞質(zhì)紅染。模型組損傷區(qū)可見明顯出血，損傷腦組織周圍神經(jīng)細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞腫脹，排列紊亂，胞漿染色較對照組淡染，透亮度增加，神經(jīng)細(xì)胞明顯表現(xiàn)出變性、壞死。與模型組大鼠比較，法舒地爾組大鼠損傷區(qū)周圍神經(jīng)細(xì)胞腫脹較輕，胞漿染色較模型組深染，透亮度下降，

4、高劑量組較低劑量組明顯。3、CaMKII免疫組化和免疫印跡：免疫組化，CaMKII陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞核，可見陽性細(xì)胞被染成棕黃色。對照組可見一定量 CaMKII陽性細(xì)胞，可見棕黃染色。與對照組比較，模型組各時間點CaMKII陽性細(xì)胞明顯增多；與模型組比較，法舒地爾組中各時間點CaMKII陽性細(xì)胞明顯減少，高劑量組較低劑量組明顯。免疫印跡，CaMKII條帶清晰，以β-actin的吸光度值作為內(nèi)參照，對各組條帶的吸光度值進(jìn)行校正和半定量分

5、析。與對照組比較，模型組CaMKII蛋白表達(dá)水平明顯升高；與模型組比較，法舒地爾組各時間點CaMKII表達(dá)水平明顯降低，高劑量組較低劑量組明顯。4、TAk-1免疫組化和免疫印跡：免疫組化，TAk-1陽性主要表達(dá)位于細(xì)胞核，陽性細(xì)胞可見被染成棕黃色的細(xì)小顆粒。對照組可見少量 TAk-1陽性細(xì)胞，棕黃染色。與對照組比較，模型組各時間點 TAk-1陽性細(xì)胞明顯增多；與模型組比較，法舒地爾組中各時間點 TAk-1陽性細(xì)胞明顯減少，高劑量組較低劑

6、量組明顯。免疫印跡，TAk-1條帶清晰，以β-actin的吸光度值作為內(nèi)參照，對各組條帶的吸光度值進(jìn)行校正和半定量分析。與對照組比較，模型組 TAk-1蛋白表達(dá)水平明顯增高；與模型組比較，法舒地爾組各時間點 TAk-1表達(dá)水平明顯減少，高劑量組較低劑量組明顯。
　　結(jié)論：1、法舒地爾可明顯增加顱腦損傷大鼠行為學(xué)評分。2、法舒地爾可減少顱腦損傷大鼠大腦皮層CaMKII的表達(dá)，高劑量組較低劑量組明顯。3、法舒地爾可減少顱腦損傷大鼠大腦