狐貉源犬瘟熱病毒分離株F基因序列分析及H、F、N基因聯(lián)合免疫小鼠誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答.pdf

1、犬瘟熱(Canine distemper，CD)是由犬瘟熱病毒(Canine distemper virus，CDV)引起的多種動物急性、高度接觸性傳染病，是毛皮動物人工養(yǎng)殖中經(jīng)常發(fā)生的重要病毒性傳染病之一，一旦流行，死亡率達30％～100％。這不但給毛皮動物養(yǎng)殖場（戶）造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失，且嚴(yán)重地影響和制約整個產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。目前常規(guī)弱毒疫苗的廣泛使用，雖然使CD得到了較好的預(yù)防和控制，但是也存在諸多缺點。比如，弱毒苗多容易受母源抗

2、體的干擾;可能有毒力返強的危險;弱毒苗對于部分野生動物也是不安全的;特別是近年來CDV的不斷變異和野毒株的出現(xiàn)，使得弱毒苗不能夠提供完全的保護。因此研究CDV的遺傳變異規(guī)律，研制新一代安全、高效的CD基因工程疫苗，對犬瘟熱的有效防控是具有極其重要的現(xiàn)實意義的。
　　本研究從黑龍江地區(qū)飼養(yǎng)場發(fā)病狐、貉中分離獲得6株犬瘟熱病毒(CDV)，分別命名為MS01、SC01、ZD01、GN01、HL01、NM01分離株。根據(jù)Genbank上發(fā)

3、表的的CDV F基因序列設(shè)計了1對特異性引物，應(yīng)用RT-PCR方法分別對6個分離株F基因進行克隆、測序，并推導(dǎo)其氨基酸序列，繪制出F基因的遺傳進化樹。結(jié)果表明:6個CDV分離株F基因的開放閱讀框架(ORF)均為1989bp，編碼663個氨基酸，蛋白結(jié)構(gòu)中的13個Cys殘基位點和4個潛在的糖基化位點均高度保守，其裂解位點的氨基酸序列為220R-R-Q-R-224R。遺傳進化分析表明:6個分離株與CDV代表強毒株A75/17屬于同一譜系，均

4、為強毒株。其中，HL01株與海豹瘟熱病毒2型(PDV-2)親緣關(guān)系較近，與其它5個分離株關(guān)系相對較遠。
　　進一步選擇其中代表性較強的MS01分離株，將其全長F基因插入真核表達載體pcDNA3.1+，并通過酶切和PCR技術(shù)在DNA水平上對其進行鑒定，表明成功構(gòu)建了pcDNA-F真核表達質(zhì)粒。
　　將所構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA-F與實驗室保存質(zhì)粒pcDNA-H和pcDNA-N聯(lián)合免疫小鼠，結(jié)果表明:3個基因混合免疫組其CD4+T