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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:構(gòu)建插入IL-18基因和PCNA的HLA-A2限制性CTI,表位的六聚體的真核表達(dá)質(zhì)粒PCNA(6)/IL-18-pIRES,并且成功體外培養(yǎng)人樹(shù)突狀細(xì)胞和T細(xì)胞。下一步構(gòu)建DC疫苗奠定基礎(chǔ)。
方法:通過(guò)基因銀行獲取PCNA基因HLA-A2限制性CTL表位的篩并構(gòu)建其片段的六聚體PCNA(6),以及全基因合成IL-18,把其裝到pBluescriptⅡ SK(+)載體質(zhì)粒上經(jīng)限制性核酸內(nèi)切酶SalⅠ/NotⅠ和Xho
2、Ⅰ/MluⅠ酶切后分別裝到真核質(zhì)粒pIRES。并進(jìn)行瓊脂糖電泳及測(cè)序鑒定,人外周血培養(yǎng)樹(shù)突狀細(xì)胞和T細(xì)胞。
結(jié)果:目的基因PCNA片段的篩選和IL-18基因片段合成見(jiàn)測(cè)序圖分別經(jīng)1.0％瓊脂糖凝膠電泳和基因測(cè)序證實(shí),成功構(gòu)建了插入PCNA(6)和IL-18基因于真核質(zhì)粒pIRES中。體外成功培養(yǎng)樹(shù)突狀細(xì)胞和T細(xì)胞。
結(jié)論:
1.成功篩選出PCNA的HLA-A2限制性CTL表位并成功合成其六聚體。
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