曲尼斯特對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖、凋亡及p57、c-myc表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　觀察曲尼斯特對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞(AVSMC)增殖、凋亡及對(duì)p57、c-myc表達(dá)的影響,初步探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法:
　　酶消化法原代提取SD大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),取5-8代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞按藥物加入濃度不同共分為5組,分別為曲尼斯特0、12.5、25、50、100mg/L組,MTT比色法測(cè)定藥物處理12、24、48小時(shí)后各組細(xì)胞增殖速率,流式細(xì)胞學(xué)和原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒法(T

2、UNEL)檢測(cè)藥物處理12小時(shí)后細(xì)胞凋亡情況,RT-PCR法分別檢測(cè)藥物作用48小時(shí)后p57表達(dá)及作用12小時(shí)后c-myc表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　MTT比色法觀察發(fā)現(xiàn)不同濃度曲尼斯特組細(xì)胞生長率較對(duì)照組降低,其生長抑制率隨曲尼斯特加入濃度和時(shí)間增加而增加(P〈0.05),表明曲尼斯特抑制VSMC增殖在一定范圍內(nèi)存在濃度和時(shí)間依賴,經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增后,凝膠成像可見VSMC中P57表達(dá)隨藥物濃度的增加而增加,提示曲尼斯特可

3、能通過誘導(dǎo)p57表達(dá)抑制細(xì)胞增殖;流式細(xì)胞學(xué)和原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒法(TUNEL)檢測(cè)VSMC細(xì)胞凋亡示細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組增加,并且隨著曲尼斯特濃度的增加VSMC凋亡率越來越高(P〈0.05),表明曲尼斯特誘導(dǎo) VSMC凋亡在一定范圍內(nèi)存在濃度依賴,而RT-PCR擴(kuò)增后的凝膠成像可見隨著藥物濃度增加VSMC細(xì)胞內(nèi)c-myc表達(dá)減少,提示曲尼斯特可能通過抑制c-myc表達(dá)促進(jìn)VSMC凋亡。
　　結(jié)論:
　　1.尼斯特可抑制S

4、D大鼠VSMC增殖,并且該抑制作用在一定范圍內(nèi)有濃度及時(shí)間依賴關(guān)系;曲尼斯特可誘導(dǎo)VSMC凋亡,并且該誘導(dǎo)作用在一定范圍內(nèi)有濃度依賴關(guān)系。
　　2.尼斯特可誘導(dǎo)SD大鼠VSMC p57 mRNA的表達(dá)、抑制c-myc mRNA的表達(dá),并且曲尼斯特對(duì)p57、c-myc mRNA表達(dá)的影響在一定范圍內(nèi)有濃度依賴關(guān)系。
　　3.尼斯特可能通過誘導(dǎo)P57 mRNA的表達(dá)抑制VSMC增殖,通過抑制c-myc mRNA的表達(dá)來促進(jìn)VSM