電針對(duì)去卵巢大鼠腦認(rèn)知功能影響機(jī)制的研究.pdf

1、近年研究表明：性激素對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有保護(hù)作用，并影響學(xué)習(xí)及記憶功能；大腦皮層額葉、顳葉、海馬是與學(xué)習(xí)記憶有關(guān)的重要結(jié)構(gòu)，在這些部位某些神經(jīng)遞質(zhì)與學(xué)習(xí)和記憶有密切的關(guān)系；對(duì)衰老過程中性腺萎縮導(dǎo)致性激素減少，影響腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的合成與釋放、影響學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)知功能機(jī)制的研究引起了人們的重視。大量研究資料表明針刺對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌功能具有調(diào)節(jié)作用。在臨床上抗衰老、治療更年期綜合征方面有較好的療效。許多研究者從不同角度進(jìn)行者探討，但其作用機(jī)制目前還不清

2、楚。 本實(shí)驗(yàn)?zāi)康模禾接懶约に貙?duì)老年認(rèn)知功能的影響機(jī)制及電針的調(diào)節(jié)作用。 方法：選用6月齡雌性Waster雌性大鼠，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為對(duì)照組、去卵巢組和去卵巢針刺組。去卵巢針刺組在大鼠去卵巢術(shù)后7天給予電針刺激，相同條件喂養(yǎng)30天后斷頭或灌注處死動(dòng)物。采用放射免疫分析方法，測定血中性激素的含量，RT-PCR方法檢測腦內(nèi)膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(CHAT)、雌激素受體α(ERα)和雌激素受體β(ERβ)在mRNA水平上的表達(dá)。原位雜交的方

3、法，檢測大鼠海馬內(nèi)膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)；電子顯微鏡下觀察大鼠腦組織超微結(jié)構(gòu)的變化。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容分為:1，去卵巢大鼠血中性激素水平的改變及電針足三里穴的調(diào)節(jié)作用；2，電針對(duì)去卵巢大鼠腦內(nèi)膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)的影響；3，電針對(duì)去卵巢大鼠腦內(nèi)雌激素受體(ER)基因表達(dá)的影響。 結(jié)果：與對(duì)照組比較，去卵巢大鼠血中雌激素(E2)水平明顯降低，睪酮(T)水升高，同時(shí)血中的促卵泡素(FSH)和黃體生成素(LH)亦明顯升高，下丘腦內(nèi)SPmRNA表

4、達(dá)增加；與去卵巢未電針刺激組比較，去卵巢電針組大鼠血中的雌激素水平較高、血中的T較低；血中的FSH、LH也較未電針組明顯降低，下丘腦SPmRNA表達(dá)減少，并有顯著性差異。去卵巢大鼠腦內(nèi)CHATmRNA的表達(dá)減少，而去卵巢電針組大鼠腦內(nèi)的CHATmRNA的表達(dá)較高；去卵巢大鼠腦內(nèi)ERα在mRNA水平上表達(dá)減少而去卵巢后腦內(nèi)ERβ在mRNA水平上的表達(dá)卻明顯增加。電針組大鼠腦內(nèi)的ERαmRNA表達(dá)較去卵巢組多ERβmRNA表達(dá)較少。電鏡下觀

5、察到取卵巢大鼠垂體、海馬組織的超微結(jié)構(gòu)有明顯的改變而去卵巢針刺組大鼠腦內(nèi)的超微結(jié)構(gòu)改變的較輕微。 結(jié)論：去卵巢大鼠體內(nèi)出現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)分泌功能的紊亂，血中性激素水平的變化影響腦內(nèi)的有關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)和腦內(nèi)激素受體在基因水平上的表達(dá)。電針足三里穴可在基因水平上調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌的功能，提示這可能是針灸治療老年認(rèn)知功能障礙、改善學(xué)習(xí)記憶功能的機(jī)制之一。 第一部分 去卵巢大鼠血中性激素水平的改變及電針足三里穴的調(diào)節(jié)作用 目的：

6、研究電針足三里穴對(duì)去卵巢大鼠垂體促性腺激素分泌功能的調(diào)節(jié)機(jī)制。方法：制備去卵巢大鼠動(dòng)物模型，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為正常對(duì)照組(INT)、去卵巢組(OVX)、去卵巢針刺組(OVX+EA)。放射免疫分析方法(RIA)測定大鼠血中雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)的含量；電子顯微鏡下觀察實(shí)驗(yàn)各組大鼠垂體超微結(jié)構(gòu)的改變，用RT-PCR方法，獲得下丘腦SPmRNA表達(dá)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測。計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果：去

7、卵巢大鼠血中(E2)含量明顯低于正常對(duì)照組，血中FSH、LH含量分別明顯高于正常對(duì)照組，電鏡下，去卵巢大鼠垂體結(jié)構(gòu)出現(xiàn)退行性變，下丘腦SPmRNA表達(dá)產(chǎn)物較對(duì)照組明顯增強(qiáng)；去卵巢大鼠電針“足三里“穴組血中E2含量較未針刺組明顯增加(P＜0.05)，血中FSH、LH明顯低于去卵巢組，垂體超微結(jié)構(gòu)的退行性改變較去卵巢組輕P＜0.05，下丘腦SPmRNA表達(dá)產(chǎn)物較去卵巢組明顯增強(qiáng)；結(jié)論：去卵巢大鼠血中性激素及垂體功能發(fā)生了紊亂，電針“足三里“

8、穴可調(diào)整下去卵巢大鼠垂體的功能，減輕血中性激素水平變化，這可能與電針影響下丘腦的肽類物質(zhì)SPmRNA的表達(dá)及生成有關(guān)。 第二部分 電針對(duì)去卵巢大鼠腦內(nèi)膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)的影響 本工作旨在探討雌激素對(duì)腦內(nèi)乙酰膽堿生成的影響和電針刺激“足三里，，穴對(duì)去卵巢大鼠腦內(nèi)乙酰膽堿生成的調(diào)整作用。實(shí)驗(yàn)選用成年Wistar雌性大鼠，將動(dòng)物分為正常對(duì)照組(INT)、去卵巢組(OVX)、和去卵巢針刺組(OVX+AC)。用放射免疫

9、分析方法測定血中雌二醇含量，采用RT-PCR方法獲得大鼠腦內(nèi)膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(CHAT)mRNA的逆轉(zhuǎn)錄表達(dá)產(chǎn)物--cDNA，瓊脂糖凝膠電泳方法檢測，用原位雜交方法觀察海馬CHATmRNA陽性神經(jīng)元的表達(dá)，計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：去卵巢組大鼠體內(nèi)雌激素水平明顯降低，腦內(nèi)CHATmRNA的RT-PCR產(chǎn)物和海馬CHATmRNA陽性表達(dá)產(chǎn)物的平均面積、平均積分光度值均明顯減少，與對(duì)照組和針刺組比較有顯著性差異；去卵巢針刺

10、“足三里”穴組與去卵巢組相比，大鼠血中雌激素水平明顯升高，腦內(nèi)CHATmRNART-PCR產(chǎn)物明顯多，海馬的CHATmRNA表達(dá)陽性神經(jīng)元增多。以上結(jié)果提示：腦內(nèi)CHAT基因表達(dá)與體內(nèi)雌激素水平有密切關(guān)系，去卵巢后針刺“足三里”穴對(duì)CHAT的調(diào)節(jié)作用可能是針刺增強(qiáng)腦內(nèi)乙酰膽堿含量的機(jī)制之一。 第三部分 電針對(duì)去卵巢大鼠腦內(nèi)雌激素受體基因表達(dá)的影響 目的：本工作旨在研究去卵巢大鼠腦內(nèi)雌激素受體基因表達(dá)與膽堿能系統(tǒng)功

11、能的影響，以探討雌激素對(duì)學(xué)習(xí)記憶的影響機(jī)制和電針刺激“足三里”穴的調(diào)整作用。方法：實(shí)驗(yàn)選用成年Wistar雌性大鼠，將動(dòng)物分為正常對(duì)照組(INT)、去卵巢組(OVX)、和去卵巢針刺組(OVX+EA)。用放射免疫分析方法測定血中雌二醇(E2)和睪酮(T)的含量，采用RT-PCR方法獲得大鼠雌激素受體α和雌激素受體βmRNA的逆轉(zhuǎn)錄表達(dá)產(chǎn)物-cDNA，計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：OVX組大鼠血中雌激素水平明顯降低，睪

12、酮水平明顯升高，腦內(nèi)ERαmRNA的RT-PCR產(chǎn)物較INT組減少，ERα/GADPH比值：INT組為1.36，OVX組為0.64，OVX+EA組為1.02。與INT組比較，OVX組ERβmRNA的RT-PCR產(chǎn)物升高，ERβ/GADPH比值：對(duì)照組為0.52，OVX組為0.78，OVX+EA組為0.58。；去卵巢針刺“足三里”穴組與去卵巢組相比，大鼠血中雌激素水平明顯升高，腦內(nèi)ERαmRNA的RT-PCR產(chǎn)物升高，ERβmRNA的RT