eIF4E和VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達及相關性研究.pdf

1、[研究背景]
　　 子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis，Ems)，簡稱為內(nèi)異癥，是指具有生長能力的活性子宮內(nèi)膜在子宮腔以外的部位異常種植生長。它是育齡婦女的常見病、多發(fā)病，嚴重困擾著育齡女性的身心健康，受到人們的日益重視。發(fā)病率高達10％～15％，文獻報道發(fā)病率有逐年增加的趨勢。目前有關Ems的發(fā)病機制尚不清楚，至今文獻報道有多種學說，被廣泛接受的傳統(tǒng)的三種學說為:子宮內(nèi)膜種植學說、體腔上皮化生學說及淋巴靜脈播散學說，但

2、傳統(tǒng)的學說均存在一定的局限性，不能完全解釋Ems的發(fā)病機制。近年來，隨著免疫學及分子生物學技術的發(fā)展，對Ems的基礎研究進入到了更深的層次，有關Ems的病因?qū)W在免疫學機制、血管生成機制、細胞抗凋亡機制、遺傳易感性、環(huán)境因素、細胞外基質(zhì)等方面取得了較大的進展，這些病因?qū)W說的提出為Ems的發(fā)病機理、發(fā)生發(fā)展及治療策略開辟了新的研究領域，特別是血管生成機制的提出為Ems的抗血管生成治療奠定了堅實的理論基礎。
　　 血管生成這一概念最早

3、于1935年Hertig在觀察胎盤組織新生血管形成的過程中首先采用。而對血管生成過程的深入研究卻緣于1971年Folkman等對實體腫瘤生長的研究，同時他還提出了“腫瘤生長和轉(zhuǎn)移都依賴于新生血管形成”這一概念，現(xiàn)這一觀點在學術界已達成共識。新生血管生成在多種腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起著關鍵的作用，以新生血管為作用靶點的抗血管生成治療也是近年腫瘤靶向治療的熱點，且文獻報道其療效顯著。Ems雖為良性疾病，卻具有浸潤生長、種植轉(zhuǎn)移及容易復

4、發(fā)等類似腫瘤的惡性生物學行為，新生血管生成在Ems的發(fā)生發(fā)展同樣作用顯著。婦產(chǎn)科專家郎景和院士也指出“異位內(nèi)膜必須突破腹水、腹腔細胞及腹腔細胞外基質(zhì)三道防線，完成粘附、侵襲及血管生成才能在盆腹腔表面成功種植生長”，即Attachment-Aggression-Angi--ogenesis(3A三部曲學說)，該學說證實了血管生成在Ems發(fā)病中的重要地位。
　　 血管生成過程受局部微環(huán)境、體內(nèi)激素、血管生成相關因子、癌基因和抑癌基因

5、等共同調(diào)控，局部血管形成因子與抑制因子是否平衡及血管內(nèi)皮細胞與細胞外基質(zhì)是否協(xié)調(diào)決定了異位內(nèi)膜是否能種植、侵襲及轉(zhuǎn)移?？寺『丸b定出來的與血管生成相關的因子有30多種，血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelialgrowth factor，VEGF)是鑒定出來的最關鍵的血管生成因子。VEGF是1989年Ferrarra在牛垂體濾泡星狀細胞培養(yǎng)液中分離純化出來的一類糖蛋白，在生理性、病理性的血管形成中均發(fā)揮強烈作用。VEGF通

6、過與其受體結(jié)合，激活細胞內(nèi)的信號級聯(lián)通路，調(diào)控細胞的增殖、遷移、存活，改變細胞的通透性等，從而刺激血管內(nèi)皮細胞增生、移位，增加血管通透性，誘導新生血管形成。
　　 真核細胞翻譯起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E，eIF4E)為一種新的腫瘤標志物，在蛋白質(zhì)翻譯的調(diào)節(jié)中起中心作用，其過度表達選擇性地加強加強一些惡性蛋白的表達，如血管生成相關蛋白(VEGF、成纖維生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-β)、

7、細胞增殖相關蛋白(cyclin D(1)、c-myc基因產(chǎn)物)以及細胞轉(zhuǎn)移相關蛋白(MMPs等)等。VEGF便是eIF4E上調(diào)的重要因子之一，兩者的聯(lián)合作用在血管生成中作用顯著。因此，eIF4E作為蛋白質(zhì)翻譯過程中關鍵因子，VEGF作為血管生成過程中的關鍵因子，兩者過量表達在Ems發(fā)生發(fā)展及種植轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮重要作用。
　　 [研究目的]
　　 采用SP免疫組化檢測正常內(nèi)膜、Ems患者在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜中eIF4E和VE

8、GF蛋白的表達情況，探討eIF4E和VEGF的表達與Ems臨床特征的關系，分析eIF4E和VEGF在Ems中的表達是否相關，為Ems早期診斷及靶向治療提供堅實的理論基礎。
　　 [材料與方法]
　　 1.臨床資料
　　 實驗組:隨機選取2010年9月至2011年5月在南方醫(yī)科大學附屬南方醫(yī)院行腹腔鏡或開腹手術、病理檢查確診的內(nèi)異癥患者30例為實驗組，取其異位內(nèi)膜組織及在位內(nèi)膜組織。實驗組患者平均年齡31.2±7.

9、8歲;增生期18例，分泌期12例;按r-AFS(Revised American Fertility Society,美國生育協(xié)會修正分期法)分期:Ⅰ期3例，Ⅱ期8例，Ⅲ期13例，Ⅳ期6例。
　　 對照組:選取同期在我院婦產(chǎn)科因“單純子宮肌瘤”行腹腔鏡子宮全切術的4例患者以及因“原發(fā)性或繼發(fā)性不孕癥”行腹腔鏡檢查術的16例患者，共20例患者作為對照組。子宮肌瘤患者剖開切除的子宮于宮底部獲取少量子宮內(nèi)膜，不孕癥患者于術中行刮宮術刮

10、取少量新鮮子宮內(nèi)膜，此為正常內(nèi)膜組。刮取的子宮內(nèi)膜均由病理證實為正常的子宮內(nèi)膜。
　　 2.方法
　　 先行HE病理形態(tài)學觀察，明確切片是否能納入實驗，同時確定各組內(nèi)膜月經(jīng)周期分期。SP免疫組化法檢測三組內(nèi)膜中eIF4E、VEGF蛋白的表達情況。
　　 3.結(jié)果判讀
　　 以細胞漿出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性反應。用image pro-plus6.0專業(yè)圖像分析軟件對eIF4E及VEGF蛋白的表達情況進行

11、半定量分析，計算出每張切片中蛋白表達的平均光密度值(mean optical density, MOD)，MOD=sum(IOD)/sum(area)。MOD值越高，蛋白表達越強。
　　 4.統(tǒng)計方法
　　 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件建立數(shù)據(jù)庫。采用方差分析法或非參數(shù)檢驗法分析eIF4E、VEGF在三組內(nèi)膜中的表達是否具有統(tǒng)計學差異，同樣方法分析eIF4E、VEGF的表達與Ems臨床特征的關系，eIF4E和VEGF的相

12、關性采用Pearson相關分析法。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 [結(jié)果]
　　 1.3組內(nèi)膜中eIF4E的表達
　　 1.1.表達部位eIF4E主要定位于腺上皮細胞的細胞漿，呈棕黃色彌漫性分布。異位內(nèi)膜組腺體強陽性表達，間質(zhì)微弱表達;在位、正常內(nèi)膜組腺體弱陽性表達，間質(zhì)無明顯表達。
　　 1.2.表達強弱eIF4E在異位、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜中的MOD值分別為0.222±0.039、0.154±

13、0.015和0.109±0.018。兩兩比較eIF4E表達的強弱依次為異位內(nèi)膜＞在位內(nèi)膜＞正常內(nèi)膜，差異有統(tǒng)計學意義(x2=62.91，P=0.000)。
　　 2.3組內(nèi)膜中VEGF的表達
　　 2.1.表達部位VEGF主要定位于腺上皮細胞的細胞漿及細胞膜中，呈棕黃色彌漫性分布。異位內(nèi)膜組腺體強陽性表達，間質(zhì)微弱表達;在位、正常內(nèi)膜組腺體弱陽性表達，間質(zhì)無明顯表達。
　　 2.2.表達強弱VEGF在異位、在位內(nèi)

14、膜及正常內(nèi)膜中的MOD值分別為0.195±0.050，0.131±0.021，0.084±0.019。兩兩比較VEGF表達的強弱依次為異位內(nèi)膜＞在位內(nèi)膜＞正常內(nèi)膜，差異有統(tǒng)計學意義( x2=62.91，P=0.000)。
　　 3.表達與內(nèi)膜分期的關系正常內(nèi)膜、在位內(nèi)膜中eIF4E、VEGF在分泌期的表達高于增生期，差異有統(tǒng)計學意義(F=10.59，P=0.004; F=6.967，P=0.013)。
　　 4.表達與r

15、-AFS臨床分期的關系eIF4E的表達與Ems患者r-AFS臨床分期無統(tǒng)計學差異。Ems患者VEGF表達Ⅲ-Ⅳ期明顯高于Ⅰ-Ⅱ期，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.02)。
　　 5.eIF4E與VEGF兩者表達的相關性異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜組eIF4E與VEGF的表達呈正相關（r=0.871，P＜0.01;r=0.798，P＜0.01），正常內(nèi)膜中eIF4E及VEGF的表達無明顯相關性(r=0.296，P=0.205)。
　　 [

16、結(jié)論]
　　 1.在位內(nèi)膜eIF4E及VEGF的表達較正常內(nèi)膜發(fā)生了明顯的改變，提示Ems在位內(nèi)膜已具有與正常內(nèi)膜不同的生物學特征，在位內(nèi)膜生物學行為的改變可能是Ems發(fā)生的一個重要原因，使其更容易在盆、腹腔表面種植生長，這也在一定程度上佐證了“在位內(nèi)膜決定論”。
　　 2.異位內(nèi)膜中eIF4E及VEGF蛋白的表達較在位內(nèi)膜、正常內(nèi)膜中表達顯著性增加，提示兩者可能促進異位病灶的粘附、浸潤及血管生成，促進Ems的發(fā)生、發(fā)展

17、。
　　 3.eIF4E、VEGF在Ems患者異位和在位內(nèi)膜表達呈正相關，正常內(nèi)膜中表達無明顯相關，提示eIF4E可能通過促進VEGF分泌而發(fā)揮促血管生成作用，兩者在Ems的血管生成中有相互促進作用。
　　 4.eIF4E、VEGF在正常內(nèi)膜及在位內(nèi)膜中的表達分泌期高于增生期，提示分泌期內(nèi)膜生物活性高，血管生成能力強，隨經(jīng)血逆流至腹腔后更容易粘附種植。
　　 5.eIF4E表達與Ems的r-AFS臨床分期無顯著性