miR-542-5p在漿液性卵巢癌中的表達及其作用機制的研究.pdf

1、卵巢癌（Ovarian cancer）是最常見的女性生殖系統(tǒng)的惡性腫瘤之一，其死亡率居女性生殖道惡性腫瘤的首位。因卵巢癌發(fā)病機制尚不明確，早期無明顯臨床癥狀，70％以上的患者在腫瘤進展為中晚期時才被發(fā)現(xiàn)。由于目前尚缺乏早期篩查和診斷措施，其5年存活率僅30%。因此，我們迫切的需要了解卵巢癌的發(fā)生機制，尋找一種能夠早期診斷或有效治療卵巢癌的方法。MicroRNA(miRNA)是新發(fā)現(xiàn)的長度為19-25個核苷酸的內(nèi)源性小非編碼RNA，其通過

2、直接降解靶mRNA或抑制蛋白質(zhì)翻譯來負性調(diào)控其對應靶基因的表達。miRNA參與了細胞的增殖，分化，生長代謝以及凋亡等生物進程，與腫瘤的產(chǎn)生和進展聯(lián)系密切。越來越多的證據(jù)表明，大量miRNA在人類卵巢癌組織中異常表達，其參與了卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展過程，并發(fā)揮重要作用。這些表達異常的miRNA有可能成為卵巢癌早期診斷和評價預后的疾病標志物，并且有可能成為卵巢癌的治療靶點。因此，對于miRNA和卵巢癌相關性的研究具有十分重要的意義和價值。近年來

3、有文獻報道，漿液性卵巢癌并非起源于正常的卵巢組織，而是來源于輸卵管上皮。本研究小組前期通過miRNA芯片技術篩選漿液性卵巢癌和正常輸卵管傘端上皮組織中差異性表達的miRNA，發(fā)現(xiàn)miR-542-5p在漿液性卵巢癌組織中表達明顯下調(diào)，差異倍數(shù)達25倍，表明它可能參與了漿液性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展。研究表明，miR-542-5p在多種腫瘤組織中表達異常，參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展,但目前國內(nèi)外均未見對其與卵巢腫瘤相關性的報道。為了進一步明確miR-54

4、2-5p在卵巢癌中的表達，并初步了解卵巢癌發(fā)生和進展的分子機制，本研究將對其在卵巢癌組織中的表達進行大樣本的PCR驗證、對卵巢癌細胞系的相關生物學行為的影響等問題進行初步探討，初步預測并驗證其作用的下游靶基因。
　　目的：
　　1.檢測miR-542-5p在漿液性卵巢癌中的表達情況，并分析miR-542-5p的表達與漿液性卵巢癌臨床病理特征之間的關系，探討其意義。
　　2.探討miR-542-5p對卵巢癌細胞系SKOV

5、3的增殖、遷移、侵襲、凋亡等惡性生物學行為的影響。
　　3.預測并驗證其作用的靶基因，進一步明確miR-542-5p在漿液性卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制。
　　方法：
　　1.采用實時熒光定量PCR技術分析100例漿液性卵巢癌組織及50例正常輸卵管傘端組織中miR-542-5p的表達，將檢測結果進行統(tǒng)計學分析。
　　2.將miR-542-5p mimics、mimics NC(mimics陰性對照)轉染卵巢癌細胞S

6、KOV3。采用MTT實驗、劃痕實驗、Transwell實驗和流式細胞術檢測過表達miR-542-5p對SKOV3細胞增殖、遷移、侵襲、凋亡的影響。
　　3.通過生物信息學軟件預測出miR-542-5p可能作用的靶基因，并采用RT-PCR、Western-blot技術和雙熒光素酶報告系統(tǒng)分別進行驗證。
　　結果：
　　1.漿液性卵巢癌組織中miR-542-5p的表達顯著低于正常輸卵管傘端組織（P＜0.05)。miR-54

7、2-5p的表達與漿液性卵巢癌各臨床病理特征之間差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　2.過表達miR-542-5p后，SKOV3細胞的增殖能力較陰性對照和正常SKOV3細胞明顯降低（P＜0.05）；transwell實驗和劃痕實驗顯示，過表達miR-542-5p后，細胞的遷移和侵襲能力較陰性對照組明顯下降（P＜0.05）；流式細胞術結果顯示，過表達miR-542-5p后，SKOV3細胞的凋亡率較陰性對照組升高，而對細胞周期無影

8、響。
　　3.通過多種軟件預測，選取了miR-542-5p可能作用的靶基因為Ywhab。RT-PCR分析結果顯示，過表達miR-542-5p后，SKOV3細胞中Ywhab的含量較陰性對照和正常SKOV3細胞明顯降低；Western-blot技術分析結果提示，轉染了miR-542-5p類似物的細胞中，Ywhab蛋白的表達較陰性對照降低；雙熒光素酶報告系統(tǒng)結果顯示：miR-542-5p能夠抑制含有其結合位點的野生型質(zhì)粒的熒光素酶活性，

9、而對其對照組和含有突變位點的質(zhì)粒無明顯影響。
　　結論：
　　1.miR-542-5p可能作為抑癌基因參與了漿液性卵巢癌的發(fā)生，對于卵巢癌的早期診斷及治療具有潛在意義。
　　2.過表達miR-542-5p可以抑制卵巢癌細胞SKOV3的體外增殖、遷移和侵襲能力，誘導凋亡。提示miR-542-5p在卵巢癌惡性生物學進程中可能發(fā)揮重要作用。
　　3.Ywhab有可能是miR-542-5p作用的靶基因之一，miR-542