祛風(fēng)通竅方對血管性癡呆大鼠線粒體氧化損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的:研究祛風(fēng)通竅方對血管性癡呆(VD)大鼠線粒體(MIT)超氧化物歧化酶(SOD)、細(xì)胞色素氧化酶(COX)、丙二醛(MDA)及超微結(jié)構(gòu)影響,初步探討祛風(fēng)通竅方對VD大鼠海馬MTI氧化損傷的保護(hù)機(jī)制。方法:1.分組方法:造模前后利用Morris水迷宮篩選,符合要求的雄性SD大鼠60只,隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、尼莫地平組(簡稱“陽性組”)、祛風(fēng)通竅方高劑量組(簡稱“高劑量組”)、祛風(fēng)通竅方中劑量組(簡稱“中劑量組”)、祛風(fēng)通竅方低劑量

2、組(簡稱“低劑量組”)各10只;2.造模方法:選用永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈(2-VO)法造模;3.給藥方法:陽性組予尼莫地平6.25mg/kg/d灌胃,高、中、低劑量組分別給予祛風(fēng)通竅方26.8g/Kg/d、13.4g/Kg/d、6.7g/Kg/d灌胃,假手術(shù)組、模型組予等體積蒸餾水灌胃,連續(xù)30天;3.取材:Morris水迷宮檢測大鼠行為學(xué),每組隨機(jī)抽2只心臟灌注內(nèi)固定,取腦組織;余下大鼠處死后取海馬,制成海馬勻漿,差速離心法提取MIT

3、,﹣80℃保存。4.指標(biāo)檢測:化學(xué)比色法檢測SOD活性、MDA含量;ELISA法檢測COX活性;RT-PCR法檢測細(xì)胞色素C氧化酶Ⅱ亞型(COXⅡ)的mRNA表達(dá),光鏡觀察錐體細(xì)胞及電鏡觀察線粒體形態(tài)變化。結(jié)果:1.行為學(xué)情況:與假手術(shù)組比較,模型組、陽性組及高、中、低劑量組逃避潛伏期(EL)延長,原平臺象限停留時間縮短,跨越虛擬平臺次數(shù)減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,陽性組,高、中劑量組學(xué)習(xí)記憶功能顯著改善,大鼠

4、EL隨著訓(xùn)練時間延長而縮短,原平臺象限的停留時間延長,跨越虛擬平臺的次數(shù)增加,高劑量組最明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),低劑量組EL有減少,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。2.SOD、MDA、COX檢測:與假手術(shù)組比較,模型組、陽性組及高、中劑量組SOD活性降低,MDA含量升高,COX活性降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,陽性組及高、中劑量組SOD活性升高, MDA含量降低,COX活性升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(

5、P<0.05);與陽性組比較,高劑量組SOD活性增強(qiáng),MDA含量降低,COX活性增強(qiáng),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與高劑量組比較,中、低劑量組SOD活性降低、MDA含量升高,COX活性降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。3.光鏡觀察海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞結(jié)果:假手術(shù)組錐體細(xì)胞3～4層,排列整齊緊密;細(xì)胞完整,形態(tài)正常,界限清晰,胞核大而圓,胞質(zhì)豐富;模型組錐體細(xì)胞丟失明顯,細(xì)胞1～2層,排列散亂;界限不清,大量細(xì)胞變形;核固縮碎

6、裂、呈深藍(lán)色、胞漿濃縮;陽性組及高、中劑量組錐體細(xì)胞形態(tài)得到了明顯改善。4.電鏡結(jié)果:假手術(shù)組MIT結(jié)構(gòu)正常,嵴結(jié)構(gòu)清晰;模型組MIT明顯水腫破裂,MIT嵴結(jié)構(gòu)不清晰,MIT部分固縮;陽性組、高劑量組MIT受損情況得到了明顯改善;中、低劑量組MIT改變介于陽性組與模型組之間。5.COXⅡ的mRNA表達(dá):各組目的基因條帶均出現(xiàn),與假手術(shù)組比較模型組基因條帶亮度變暗,各給藥組基因條帶亮度相對變亮;相對灰度值:與假手術(shù)組比較,模型組及各治療組

7、相對灰度值降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,陽性組及高、中劑量組灰度值明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與陽性組比較,高劑量組灰度值增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與高劑量組比較,中、低劑量組灰度值降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:1.祛風(fēng)通竅方可改善VD大鼠學(xué)習(xí)記憶功能,改善VD大鼠海馬錐體細(xì)胞及額葉皮層MIT的形態(tài)。2.祛風(fēng)通竅方對VD大鼠線粒體氧化損傷的保護(hù)作用呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。