能量可控陡脈沖對惡性腫瘤凋亡和增殖影響的實驗研究.pdf

1、陡脈沖電場對細胞膜的不可逆性擊穿導致腫瘤細胞死亡的原理使其有可能成為惡性腫瘤低創(chuàng)或微創(chuàng)物理治療的新方式，而經(jīng)陡脈沖處理后，處理中心邊緣的腫瘤細胞(即：處理旁中心區(qū)域)增殖活性是影響陡脈沖治療效果的重要因素。本課題采用能量可控陡脈沖(energycontrollablesteeppulse，ECSP)對在體腫瘤模型和體外培養(yǎng)腫瘤細胞進行處理，探討能量可控陡脈沖對處理旁中心區(qū)域的腫瘤組織增殖和凋亡的影響，以及影響腫瘤細胞增殖活性的可能機制，

2、為臨床試驗提供理論依據(jù)。 第一部分 能量可控陡脈沖對兔VX2乳腺癌增殖和凋亡的影響 目的：觀察能量可控陡脈沖對荷瘤兔乳腺癌細胞增殖能力和凋亡的影響，分析陡脈沖治療惡性腫瘤可能的機制以及對處理旁中心區(qū)域腫瘤組織潛在的影響。 方法：建立兔gx2乳腺癌移植瘤模型，將24只荷瘤兔隨機分為兩組，ECSP處理組(n=21)和對照組(n=3)，移植瘤經(jīng)能量可控陡脈沖處理，分別于處理后O、12、24、48、72、120、168小

3、時取腫瘤組織，分別通過蘇木素一伊紅(Haematoxylinandeosin，HE)染色、TUNEL(Terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTPnick-end-labelling，TUNEL)法、免疫組織化學染色檢測增殖細胞核抗原(Proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)的表達，觀察處理中心組織及處理旁中心區(qū)域細胞形態(tài)、腫瘤細胞凋亡及增殖細胞核抗原

4、表達的改變，并分別計算處理前后腫瘤組織凋亡指數(shù)(Apoptoticindex，AI)和細胞增殖指數(shù)(ProliferateIndex，PI)的改變。 結果：處理組經(jīng)陡脈沖處理后腫瘤組織中心發(fā)生凝固性壞死，旁中心區(qū)域有大量凋亡細胞，中心部分凋亡細胞較少；處理前對照組標本中僅見少量TUNEL陽性細胞，處理組與處理前對照組比較，凋亡指數(shù)差異具有顯著性(P<0．05)。在處理后不同的時間點觀察，處理組的細胞凋亡高峰在24小時左右，以后逐

5、漸下降。在處理組中，增殖細胞核抗原在各時間點的表達均顯著下降，且隨時間的延長表達逐漸降低，在168小時后處理組僅見散在的弱陽性細胞表達，處理組與處理前對照組相比，增殖指數(shù)差異具有顯著性。 結論：能量可控陡脈沖能夠通過誘導處理旁中心區(qū)域腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤細胞增殖，擴大陡脈沖處理的有效范圍，促進腫瘤細胞在原位滅活。 第二部分 能量可控陡脈沖抑制乳腺癌細胞增殖活性的機制初探 目的：觀察能量可控陡脈沖對乳腺癌細胞增殖

6、的抑制作用以及相關基因的表達的影響，探討能量控陡脈沖抑制腫瘤細胞增殖的可能機制。 方法：應用能量可控陡脈沖作用于人乳腺癌細胞系MDA-MB-231，于陡脈沖作用后24小時應用RT-RCR方法分別測定ECSP組和對照組中抑癌基因Rb基因及轉錄調(diào)節(jié)因子E2Fi表達的改變。 結果：陡脈沖對乳腺癌細胞的增殖有明顯抑制作用，與對照組相比ECSP組細胞數(shù)目明顯減少。ECSP組Rb基因mRNA表達明顯升高、E2FlmRNA表達明顯下降