尾加壓素系統(tǒng)在糖尿病腎病大鼠的腎臟損傷和動(dòng)脈粥樣硬化形成中的作用及酶酚酸酯對(duì)其影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿?。╠iabetesmellitus，DM）最主要的微血管并發(fā)癥，動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是糖尿病大血管病變的主要病理特征。近數(shù)十年，隨著細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展， DN的發(fā)病機(jī)制被大量研究和闡述，但其確切機(jī)制仍不明確且在臨床上缺乏有效的治療措施，因此，DN發(fā)病機(jī)制及治療仍是目前研究的重點(diǎn)。
　　尾加壓素Ⅱ（UrotensinⅡ

2、,UⅡ）被認(rèn)為是哺乳動(dòng)物體內(nèi)最強(qiáng)的血管收縮劑，與其特異性受體14（GPR14)結(jié)合后引起一系列生物學(xué)效應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，UⅡ在DN患者體內(nèi)表達(dá)上調(diào)，推測(cè)UⅡ系統(tǒng)可能在DN的病理生理過程中發(fā)揮一定作用。且以往的研究證實(shí)UⅡ與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生密切相關(guān)。
　　目的：探討UⅡ、GPR14在糖尿病腎病大鼠腎臟損傷和動(dòng)脈粥樣硬化形成中的作用及可能機(jī)制。酶酚酸酯（Mycophenolate mofetil，MMF）是一種新型免疫抑制劑，近年發(fā)現(xiàn)其

3、可以減輕蛋白尿、減少腎小球內(nèi)巨噬細(xì)胞浸潤、抑制腎小球硬化，對(duì)腎臟有一定保護(hù)作用,但目前對(duì)于MMF治療DN的研究并不多。本實(shí)驗(yàn)用MMF治療糖尿病腎病大鼠，觀察大鼠體內(nèi)UⅡ/GPR14水平的變化，探討MMF對(duì)糖尿病腎病大鼠的防治效果及其可能機(jī)制，為臨床防治糖尿病腎病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：1.建立2型糖尿病腎病并發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化形成的動(dòng)物模型：模型組喂以高糖高脂飼料，6周后造模大鼠腹腔一次注射鏈脲佐菌素(STZ)40mg/kg。

4、>　　2.分組：將造模成功且存活的17只大鼠隨機(jī)分為糖尿病腎病組（DN組8只），每日生理鹽水灌胃；MMF干預(yù)組（MZ組9只），MMF按20mg·kg-1·d-1的劑量（溶于1％羧甲基纖維素鈉）灌胃，連續(xù)10周。兩組均喂以高糖高脂飼料。另設(shè)正常對(duì)照組（NC組9只）,每日生理鹽水灌胃，喂以基礎(chǔ)飼料。16周末處死大鼠，采集標(biāo)本。
　　3.測(cè)定血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血糖(GLU)、膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋

5、白和24 h尿蛋白定量（24hU-TP）；取左腎標(biāo)本稱重，計(jì)算腎重指數(shù)（腎重/體重,KI）。
　　4.HE染色后光鏡觀察主動(dòng)脈及腎臟組織的病理變化。
　　5.免疫組化觀察UⅡ/GPR14蛋白的表達(dá)，RT-PCR技術(shù)檢測(cè)UⅡmRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果1.糖尿病大鼠（DN和MZ組）在注射STZ后表現(xiàn)多飲、多尿、消瘦，以及反應(yīng)遲鈍、活動(dòng)遲緩、精神萎靡、毛發(fā)無光澤；MZ組以上情況較DN組有不同程度的改善；NC組大鼠體重增加明顯

6、，精神狀態(tài)良好，動(dòng)作靈活。
　　2.與NC組相比, DN和MZ組大鼠的腎重指數(shù)、血糖、膽固醇、甘油三酯、血肌酐、尿素氮和24 h尿蛋白定量明顯升高，高密度脂蛋白(HDL)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01)；MZ組的上述指標(biāo)與DN組比較，有明顯改善（血糖、血脂除外），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或0.01)。
　　3.HE染色后光鏡可見:主動(dòng)脈：DN組主動(dòng)脈可見內(nèi)皮細(xì)胞損傷、泡沫細(xì)胞浸潤、平滑肌細(xì)胞變形、排列紊亂；M

7、Z組較DN組減輕；NC組動(dòng)脈壁內(nèi)皮細(xì)胞光整，排列規(guī)則。腎臟組織：DN組腎臟可見明顯腎小球肥大、系膜基質(zhì)增多，腎小管上皮細(xì)胞濁腫，可見炎細(xì)胞浸潤；MZ組較DN組輕；NC組腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)正常。
　　4.觀察UⅡ/GPR14蛋白的表達(dá)：主動(dòng)脈：與NC組相比,DN組主動(dòng)脈的UⅡ蛋白表達(dá)增加（P<0.01)；與DN組比較,MZ組UⅡ蛋白表達(dá)減少（P<0.01)。腎組織：與NC組相比, DN組腎小球的UⅡ/GPR14蛋白表達(dá)（陽性染色細(xì)胞

8、數(shù)）增多（P<0.05或P<0.01)；與DN組比較,MZ組UⅡ/GPR14蛋白表達(dá)減少（P<0.05或P<0.01)。
　　5.RT-PCR檢測(cè)腎臟UⅡmRNA表達(dá)變化：與NC組相比, DN和MZ組大鼠腎臟組織中的UⅡmRNA表達(dá)明顯增加（P<0.01)；MZ組UⅡmRNA表達(dá)較DN組減少（P<0.01)。
　　結(jié)論：1.大鼠主動(dòng)脈及腎組織中 UⅡ/GPR14的高表達(dá)提示其可能在糖尿病大鼠腎臟損傷及動(dòng)脈粥樣硬化形成的過程中