宮頸癌發(fā)生及HPV感染與腫瘤干細胞標記物表達調(diào)控的關(guān)系研究.pdf

1、目的:研究維吾爾族婦女宮頸癌及癌前病變與腫瘤干細胞標記物表達水平變化及其與人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染的依存關(guān)系，探討宮頸癌發(fā)病機制和早期預警指標。
　　方法:
　　1）收集維吾爾族婦女宮頸病變新鮮組織標本47例，其中宮頸鱗癌(CSCC)16例、宮頸內(nèi)上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅱ-Ⅲ15例、宮頸炎或正常宮頸組織(NC)16例，提取總RNA，并選擇以往研究報道已確認的腫瘤干細胞標記物，利用對宮頸癌及癌前病變組織RNA進行候選基因表達

2、水平的熒光定量RT-PCR分析，并利用統(tǒng)計學方法評價候選指標檢測的的準確度、特異性、靈敏度。
　　2）提取組織DNA，利用標準的定量PCR方法鑒定HPV陽性和感染型別，探討宮頸癌及癌前病變、干細胞標記物表達調(diào)控與HPV感染的依賴關(guān)系。
　　3)收集患者外周血標本85例，包括宮頸鱗癌40例，CINⅡ-Ⅲ28例及宮頸炎17例，利用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）方法檢測候選蛋白質(zhì)的血漿含量。
　　結(jié)果:
　　1）依據(jù)查新等

3、不同條件，選擇了ALDH1A1、OCT4、NANOG、SOX2和TWIST1等5種腫瘤相關(guān)干細胞標記物;利用熒光定量RT-PCR對47例標本進行候選基因的轉(zhuǎn)錄表達水平鑒定，發(fā)現(xiàn)隨著宮頸病變進程，上述5種干細胞標記物的表達水平呈上調(diào)趨勢，其中CSCC與NC比較，五種基因的表達均有顯著差異，CSCC與CIN比較，ALDH1A1和OCT4存在顯著差異;而CIN與NC比較，ALDH1A1、OCT4和NANOG表達水平差異有統(tǒng)計學意義，推測ALD

4、H1A1、OCT4和NANOG表達差異可能成為宮頸癌早期預警的標記物;
　　2）通過HPV陽性鑒定和分型，鑒別出HPV16、18、45、31等8種HPV感染型別，宮頸癌、CIN和宮頸炎組織的HPV陽性率分別為98.7、73.3和31.3％，其中高危型HPV16陽性率為62.5、66.6和31.3％;
　　3）總HPV感染水平上:①盡管HPV陽性的CSCC組織中，ALDH1A1、OCT4、NANOG、SOX2和TWIST1的m

5、RNA表達水平明顯高于HPV陽性的CIN和HPV陰性宮頸炎，而CSCC與CIN比較，只有OCT4轉(zhuǎn)錄表達水平差異顯著;②總HPV陽性與陰性比較，ALDH1A1、OCT4和NANOG基因的表達水平差異有統(tǒng)計學意義;HPV16感染水平上:①HPV16陽性的CSCC組織中，ALDH1A1、OCT4、NANOG、SOX2和TWIST1基因的mRNA表達水平高于HPV16陽性的CIN和陰性宮頸炎，而CSCC與CIN比較，OCT4基因表達水平差異顯

6、著，與上述結(jié)果一致;②總HPV16陽性與16陰性比較，OCT4、NANOG和SOX2表達水平差異也顯著;
　　4）對宮頸病變的不同階段與腫瘤干細胞標記物表達水平變化的關(guān)系進行Pearson相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)OCT4與NANOG或ALDH1A1呈中度相關(guān)性，其它指標之間的關(guān)系均呈低度相關(guān)。對單一干細胞標記物表達水平檢測對宮頸癌診斷的特異性和靈敏度分析，發(fā)現(xiàn)ALDH1A1、OCT4、NANOG、和TWIST等4種基因的曲線下面積均大于0

7、.7，說明四種標記物檢測的診斷準確度較高，對宮頸癌有一定的預警價值。
　　5）ELISA檢測結(jié)果顯示，CSCC伴有血漿ALDH1A1含量上升，與CINⅡ-Ⅲ或?qū)m頸炎比較有顯著差異，而CIN與宮頸炎之間無統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論:
　　1）宮頸癌發(fā)生發(fā)展與ALDH1A1、OCT4、NANOG、SOX2和TWIST1轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)存在密切關(guān)系，其中ALDH1A1、OCT4和NANOG可能成為癌前病變診斷或?qū)m頸癌早期預警的分子標