重組四價Aβ-,1-15-腺病毒疫苗接種BALB-c小鼠的免疫量效關(guān)系.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文重組四價Aβ腺病毒疫苗接種BALBc小鼠的免疫量效關(guān)系姓名：袁茂運(yùn)申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：姚志彬20080528袁茂運(yùn)碩士論文本課題組鄒俊濤博士在前期實(shí)驗(yàn)中制備了重組4xAl315腺病毒(Ad4ABl5)，它能分泌性共表達(dá)四價可折疊A1315及基因佐劑GM—CSF細(xì)胞因子，免疫T92576轉(zhuǎn)基因鼠取得了良好的效果。本實(shí)驗(yàn)則是以不同劑量Ad4xAl315接種于BALB／c鼠，尋求Ad4xA

2、Dl5疫苗的最佳免疫劑量并觀察免疫效果，為疫苗的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。材料和方法1重組Ad一4xApls的擴(kuò)增及鑒定以低代重組Ad一4xAl315及AdGMCSF反復(fù)感染293細(xì)胞(1ipofectamine2000)，獲得大量重組腺病毒顆粒。氯化銫密度梯度離心純化腺病毒Ad4ABl5及AdGMCSF。Westernblotting法檢測感染細(xì)胞上清中4xApl5的表達(dá)。ELISA法測定GMCSF的含量。2不同劑量重組Ad。4xAIIl5接

3、種BALB／c鼠的體液免疫效應(yīng)68周雄性BALB／c小鼠，按照劑量隨機(jī)分組為：109pfu組、108pfu組、107pfu組以及AdGMCSF(10ypfu)，每組6只，經(jīng)鼻黏膜途徑免疫，3周免疫1次，20斗l／只，第1次免疫后兩周首次鼠尾采血，以后每3周采血1次，采血量約100山／只，共接種6次。停止免疫后，每3周采血1次，持續(xù)采血3次。觀察抗體低度維持情況，取血清置于70“C備用。間接ELISA法檢測血清中抗體的滴度的變化情況。We