三氧化二砷體外對(duì)AML（非M-,3-）患者骨髓細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討三氧化二砷(As2O3)對(duì)體外AML(非M3)患者骨髓細(xì)胞凋亡的作用及其機(jī)制，從而為臨床應(yīng)用新藥物新方法治療AML提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1.形態(tài)學(xué)方法：在高倍顯微鏡下觀(guān)察經(jīng)瑞氏-姬姆薩染色的不同濃度梯度(0，0.5，1.0，2.0μmol/l)作用于A(yíng)ML(非M3)患者(以下簡(jiǎn)稱(chēng)AML患者)骨髓細(xì)胞不同時(shí)間(24h，48h，72h)后，細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化。 2.采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度梯度As2O3體外對(duì)AML

2、患者骨髓細(xì)胞作用72h后的細(xì)胞凋亡率。 3.采用巢氏甲基特異性PCR法(nested-methylationspecificPCR，n-MSP)檢測(cè)p16基因甲基化狀態(tài)，RT-PCR法檢測(cè)p16基因mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果：1.形態(tài)學(xué)的觀(guān)察：As2O3誘導(dǎo)AML患者骨髓細(xì)胞于24小時(shí)出現(xiàn)核膜皺縮，部分胞漿內(nèi)可見(jiàn)空泡變性，48小時(shí)達(dá)到凋亡高峰出現(xiàn)凋亡小體。 2.流式結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理結(jié)果：AnnexinV/PI標(biāo)記法

3、觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，As2O3有促進(jìn)AML患者骨髓細(xì)胞凋亡的作用。體外As2O3作用于A(yíng)ML組、正常人組72h后，隨著As2O3濃度的增加，AML患者和正常人組骨髓細(xì)胞的凋亡率都逐漸增高，各不同劑量組之間有顯著性差異(P＜0.05)；在相同藥物濃度下，As2O3對(duì)AML患者組的凋亡效應(yīng)與正常人組之間也存在顯著性差異(P＜0.05)。 3.n-MSP法：As2O3誘導(dǎo)AML患者骨髓細(xì)胞隨濃度的增加p16基因甲基化狀態(tài)明顯減弱甚至消失；RT-