Pygo2-miRNA在人腦膠質(zhì)瘤的表達(dá)及作用機(jī)制研究.pdf

1、Pygo2蛋白作為Wnt信號(hào)通路下游新功能蛋白，其表達(dá)紊亂與人腦膠質(zhì)瘤惡性程度密切相關(guān)，調(diào)控機(jī)制非常復(fù)雜，很多機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在探討人腦膠質(zhì)瘤中異常表達(dá)的miRNA對(duì)Pygo2蛋白的可能調(diào)控作用。
　　目的：研究miRNA靶向Pygo2在人腦膠質(zhì)瘤的表達(dá)及作用機(jī)制
　　方法：利用生物信息學(xué)預(yù)測軟件（targetscan，miRanda，PicTar等）預(yù)測Pygo2的miRNAs，進(jìn)而通過人腦膠質(zhì)瘤miRNA表達(dá)譜芯片

2、檢測系統(tǒng)篩選候選的靶向Pygo2-3'UTR的miRNAs。針對(duì)差異表達(dá)最大的miRNA，首先構(gòu)建成含有突變位點(diǎn)Pygo2-3'UTR的熒光素酶報(bào)告載體，然后利用Pygo2-miRNA過表達(dá)質(zhì)粒下調(diào)Pygo2，從而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖及侵襲。
　　結(jié)果：生物信息學(xué)預(yù)測軟件預(yù)測出37個(gè)與Pygo2相關(guān)的miRNAs，結(jié)合人腦膠質(zhì)瘤miRNA表達(dá)譜芯片低表達(dá)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)Pygo2可能受包括miR-31、miR-34c-5p、miR-19

3、5、miR-214在內(nèi)13個(gè)miRNAs調(diào)控。熒光素酶報(bào)告基因活性、real-time PCR驗(yàn)證及western blot實(shí)驗(yàn)提示，與其余miRNAs相比，miR-214最有可能在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中調(diào)控Pygo2的表達(dá)。在體外上調(diào)miR-214的表達(dá)引起膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲力降低。
　　結(jié)論：首次發(fā)現(xiàn)人腦膠質(zhì)瘤中Pygo2的過表達(dá)可能與miR-214相關(guān)，miR-214能夠通過下調(diào)Pygo2基因的表達(dá)抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲，