色素上皮衍生因子對(duì)缺氧復(fù)氧后血管平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、研究背景：
　　我國(guó)有心肌梗死（MI）患者超過四百萬(wàn)，并且每年以至少五十萬(wàn)的速度在增長(zhǎng)，這一疾病嚴(yán)重威脅著人民的生命和健康。目前，傳統(tǒng)的內(nèi)、外科療法對(duì)冠狀動(dòng)脈彌漫性狹窄或心肌細(xì)胞大量壞死已經(jīng)形成大量瘢痕的患者療效不佳。近年來，干細(xì)胞移植為治療MI帶來了新的希望。在眾多干細(xì)胞中，因?yàn)楣撬杌|(zhì)干細(xì)胞（MSCs）易于分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增、免疫原性低，可向損傷部位趨化等生物學(xué)特性而成為理想的移植細(xì)胞，是目前國(guó)際上研究的熱點(diǎn)。越來越多的研究表明

2、MSCs在MI處主要通過旁分泌作用促進(jìn)MI的恢復(fù)。即MSCs可以在梗死部位分泌大量的活性因子發(fā)揮多種生物學(xué)作用。色素上皮衍生因子（pigment epithelium-derived factor，PEDF）是 MSCs分泌的一種重要的細(xì)胞因子，屬于無蛋白酶抑制劑功能的絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族成員，廣泛存在于人的組織中，具有營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)神經(jīng)、抑制腫瘤、抑制血管生成、抗氧化、抗炎和抑制血栓形成等特性。其中，PEDF抑制血管生成的功能引起了廣

3、泛的關(guān)注，但其抑制新生血管生成的機(jī)理尚未完全明確。前期研究都集中于對(duì)MSCs分泌的促進(jìn)血管生成因子的生物學(xué)行為對(duì)MI病理過程作用及機(jī)制的研究，但對(duì)于抑制血管生成因子的研究鮮有報(bào)道。本研究通過缺氧/復(fù)氧(H/R)模型模擬缺血再灌注損傷，初步探討重組人源性PEDF對(duì)缺氧/復(fù)氧后血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）和增殖及凋亡的影響及其機(jī)制，為MSCs移植治療 MI帶來新的靶點(diǎn)。
　　研究方法：
　　以組織貼塊法原代培養(yǎng)VSMCs，隨機(jī)分

4、為3組，即對(duì)照組、H/R模型組及模型+PEDF組。模型+PEDF組又按 PEDF的濃度（50、100、200及400ng/ml）分為4組。用MTT比色法檢測(cè)VSMCs增殖的變化；用Hoechst/PI雙染色法和流式細(xì)胞儀法（FCM）檢測(cè)VSMCs的凋亡；用Western Blot測(cè)定VSMCs凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)。
　　研究結(jié)果：
　　1．MTT比色法檢測(cè)顯示：H/R可以促進(jìn)VSMCs增殖，經(jīng)PEDF處理后，

5、能抑制其增殖，以濃度為200ng/ml效果最為顯著(P<0.01)。
　　2．Hoechst/PI雙染色法和流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)顯示：經(jīng)200ng/ml PEDF+H/R處理后，VSMCs凋亡率較對(duì)照組和H/R組明顯增高(P<0.01)
　　3．Western Blot檢測(cè)顯示：VSMCs經(jīng)200ng/ml的PEDF+H/R處理，能夠下調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)并上調(diào)Bax蛋白表達(dá)(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　

6、　1．H/R能夠誘導(dǎo)VSMCs的異常增殖，PEDF能夠抑制H/R后VSMCs的異常增殖，促進(jìn)其凋亡，其抑制效果最顯著的PEDF濃度是200ng/ml。但是，PEDF對(duì)常氧條件培養(yǎng)的VSMCs增殖沒有抑制作用，可能會(huì)使PEDF的應(yīng)用更加廣泛。
　　2．PEDF誘導(dǎo)VSMCs的凋亡，其通路可能是通過上調(diào)凋亡相關(guān)蛋白Bax表達(dá)，下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)。是否還有其他通路有待進(jìn)一步研究證實(shí)。
　　3．通過我們采用的組織貼塊法培